Впч и белок в моче
Введение
Вирус папилломы человека (ВПЧ) является одним из самых часто передаваемых половым путем возбудителем инфекции. Примерно 80% сексуально активных женщин хотя бы раз в жизни были инфицированы одним из штаммов ВПЧ, а у 10-20% развивается персистирующая инфекция [1]. При этом определенные штаммы ВПЧ ассоциированы с развитием рака шейки матки, поэтому широко используется скрининговый метод цервикальной цитологии, который позволяет выявить предопухолевую цервикальную интраэпителиальную неоплазию [2]. Несмотря на скрининговые меры, рак шейки матки остается одним из самым распространенным типом злокачественных новообразований у женщин младше 35 лет [3].
Определение ВПЧ в шейке матки согласно клиническим рекомендациям относится к методам, как скрининга рака шейки матки, так и методом вторичной профилактики. Однако он имеет ряд недостатков: инвазивность и длительное время ожидания результата. Поэтому альтернативой может служить определение ВПЧ по анализу мочи. Чтобы оценить точность данного метода были проведены мета-анализ и систематический обзор, в котором сравнивались обнаружение вируса папилломы человека в моче и непосредственно в шейке матки.
Материалы и методы
В анализ были включены исследования, найденные по данным поиска в Medline, Embase, the Cochrane Library, Web of Science, BIOSIS, DARE, SIGLE. MeSH до декабря 2013 года.
Критерием включения исследования в последующий анализ служило сравнение метода определения ДНК ВПЧ по анализу мочи или в шейке матки у сексуально-активных женщин для выявления либо самой инфекции, либо рака шейки матки. При этом брались во внимание штаммы ВПЧ, ассоциированные с высоким рисков развития рака: 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68, 73 и 82.
Результаты
Из 1373 возможных исследований, 21 (число женщин 2277) были включены в систематический обзор, из которых 14 (n=1443) – в мета-анализ.
Большая часть исследований (15 из 21) проводилась в качестве скрининга рака шейки матки, 5 – для наблюдения пациентами с ранее выявленным ВПЧ и одно для наблюдения за лицами с ранее диагностированной предопухолевой цервикальной интраэпителиальной неоплазией. 4 из 21 исследования проводились среди женщин с положительными антителами против ВИЧ.
Определение ВПЧ по анализу мочи имело индивидуальную чувствительность от 53% до 99% и специфичность – от 38% до 99%.
Определение в анализе мочи штаммов ВПЧ, ассоциированных с высоким риском развития рака шейки матки, имело чувствительность от 50% до 98% и специфичность от 17% до 99%. Для штаммов 16 и 18 данные показатели составили от 23% до 97% и от 56% до 99%, соответственно.
Обнаружение в моче любого штамма ВПЧ имело объединенную чувствительность 87% (95% CI, 78%-92%) и специфичность 94% (95% CI, 82% -98%). Выявление штаммов ВПЧ, обладающих высоким риском последующего развития рака шейки матки имело объединенную чувствительность 77% (95% CI, 68%-84%) и специфичность 88% (95% CI, 58%- 97%). Определение штаммов ВПЧ 16 и 18 – 73% (95% CI, 56% -86%) и 98% (95% CI, 91%-100%), соответственно.
Обсуждение
Использование анализа мочи для диагностики возбудителей заболеваний, передающихся половым путем, уже активно применяется для выявления Chlamydia trachomatis и Neisseria gonorrhea. Поэтому, является логичным возможность диагностики ВПЧ этим же способом.
Результаты данного мета-анализа и систематического обзора показали, что по точности выявления ВПЧ анализ мочи не уступает цервикальному методу, так как обладает высокой специфичностью.
Было также продемонстрировано, что положительный результат в 15 раз чаще имел место у инфицированных ВПЧ женщин, чем у неинфицированных. Это является одним из главных достоинств этого метода тестирования, так как ложный положительный результат ведет за собой необходимость проведения инвазивных методов, таких как, цитология, кольпоскопия или биопсия, чтобы подтвердить отсутствие заболевания.
Однако, интерпретировать результаты следует с определенной осторожностью. В первую очередь из-за не очень высокой чувствительности метода и тому, что отрицательный результат только в 7 раз чаще встречался у неинфицированных женщин по сравнению с имеющими ВПЧ. А также из-за отсутствия стандартизированного метода определения ВПЧ в моче и вариации индивидуальной чувствительности и специфичности по данным разных исследований.
Заключение
Результаты проведенного анализа демонстрируют точность метода выявления вируса папилломы человека по анализу мочи. Определение ВПЧ в моче может являться альтернативой инвазивному методу цервикальной цитологии для охвата большого числа женщин. Однако, результаты стоит интерпретировать с осторожностью, учитывая отсутствие стандартизированного метода исследования мочи и невысокой чувствительности.
Источник: Neha Pathak, Julie Dodds, Javier Zamora, Khalid Khan. Accuracy of urinary human papillomavirus testing for presence of cervical HPV: systematic review and meta-analysis. BMJ 2014; 349. (Published 16 September 2014).
Литература
- Einstein MH, Schiller JT, Viscidi RP, Strickler HD, Coursaget P, Tan T, et al. Clinician’s guide to human papillomavirus immunology: knowns and unknowns. Lancet Infect Dis2009;9:347-56.
- Smith JS, Lindsay L, Hoots B, Keys J, Franceschi S, Winer R, et al. Human papillomavirus type distribution in invasive cervical cancer and high-grade cervical lesions: a meta-analysis update. Int J Cancer2007;121:621-32.
- National Cancer Intelligence Network. Cervical cancer incidence and screening coverage. 2014.
Источник
Расшифровка результатов ПЦР-анализа на папилломавирус, Digene-теста и их разновидностей не отличаются, поскольку количество микроорганизмов и их тип не зависит от метода обнаружения.
Готовый анализ на ВПЧ выглядит в виде бланка, на котором указываются:
- Дата исследования. Она очень важна, поскольку концентрация ВПЧ часто оценивается в динамике. В этом случае самым важным фактором является рост концентрации вируса. Быстрое увеличение уровня ВПЧ гораздо опаснее слегка его повышенной концентрации, сохраняющейся в течение длительного времени. Поэтому результаты анализа надо сохранить.
- Номер пробирки, присваиваемый каждому образцу, поступающему в лабораторию.
- ФИО пациента и его пол.
- Данные врача и лаборатории, проводившей исследование.
Результат анализа выдается в виде таблицы, где указывается абсолютная и относительная концентрация каждого из вирусов и общая вирусная нагрузка. В нём обязательно указывается концентрация вирусов штаммов 16, 18 и 31, чаще всего вызывающих рак шейки матки, и остальных, которые предусмотрены данным методом исследования.
Пример бланка с результатами анализов на папилломавирус
Бланк анализа на ВПЧ
Абсолютная вирусная нагрузка – это количество вируса обнаруженного в образце. Если ВПЧ отсутствует или его концентрация не превышает клинически значимую, в бланке ставится пометка «вирус отсутствует» или «не обнаружен». Такая запись не означает, что возбудителя вообще нет в организме. Это маловероятно, поскольку папилломавирус встречается у 80% населения. Просто его концентрация недостаточна для развития рака шейки матки и других заболеваний.
Если абсолютное содержание ВПЧ превышает клинически значимое, напротив штамма вируса указывается его концентрация (вирусная нагрузка). Чем она выше, чем хуже результат.
Абсолютная вирусная нагрузка ВПЧ при поражениях шейки матки разной тяжести, копий/мл (геном-эквивалентов на 105 клеток эпителия человека). Таблица результатов
| Вирусная нагрузка | Поражение шейки матки | Показатель Lg (абсолютных копий) ВПЧ/10 5 клеток |
| Клинически малозначимая | от 103 до 105 | < 3 |
| Умеренная | 105–107 | 3 – 5 |
| Высокая | Более 107 | Более 5 |
Чем выше концентрация вирусов в мазке, тем существеннее риск возникновения болезней вызываемых папилломавирусом – злокачественных опухолей, бородавок, кондилом, папиллом, папилломатоза дыхательных путей.
В бланке указывается показатель КВМ – контроль взятия материала, характеризующий его качество. Нормальный показатель КВМ должен быть не менее 4. Его уменьшение говорит о нехватке нормального объема ДНК, необходимого для проведения исследования. При низком КВМ проводится повторное взятие материала.
Относительная нагрузка – отношение вирусной нагрузки к КВМ. Результат расшифровки показателя таблицы
| Относительная нагрузка | Расшифровка |
| «Не выявлено». | Вирус в организме не обнаружен или его концентрация невелика |
| Отрицательный показатель | Количество вирусов гораздо меньше числа здоровых клеток. Возбудитель находится в «спящем» состоянии или его концентрация снижается |
| Положительный показатель | Распространение инфекции или ее рецидив (возврат) после лечения. Это плохой результат анализа ВПЧ |
Общая вирусная нагрузка важна в случае, если имеется поражение несколькими возбудителями. Для подсчета суммируют все имеющиеся вирусные показатели.
По расшифровке результатов анализа, в котором выявлены те или иные типы ВПЧ, можно выявить, какое именно заболевание грозит пациенту.
Таблица расшифровки анализа на ВПЧ с вероятным диагнозом
| Заболевания | Штамм ВПЧ |
| Различные типы бородавок – обычные (вульгарные), юношеские (плоские), подошвенные (шипицы) | 1-4, 10, 26, 27 – 29, 49, 57 |
| Бородавки мясников (крупные бородавчатые наросты на теле) | 7 |
| Верруциформная эпидермодисплазия – заболевание, сопровождающееся появлением грубых толстых наростов на лице, теле и конечностях, напоминающих кору дерева | 2, 3, 5, 8-10-12, 14, 15, 18- 20, 36, 37, 46, 47, 50 |
| Кондиломы (генитальные бородавки) | 6, 11, 16, 18, 33, 39, 40, 42-43, 51-52 54-55, 57, 61-62, 64-67 |
| Дисплазия и рак шейки матки. Злокачественные опухоли анального канала прямой кишки | 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39-40, 42-43, 45, 50 – 52, 54-56 ,61- 62, 64, 66, 68 |
| Эпителиальная гиперплазия – заболевание, сопровождающееся появлением наростов на коже | 13, 32 |
| Папилломатоз дыхательных путей – разрастание полипов в носоглотке и трахее | 6,11,30 |
| Злокачественные опухоли лёгких и шеи | 2,6, 11, 16,18, 30 |
Как сделать интерпретацию результата анализов на ПЦР максимально точной
Для этого нужно сдать анализ с поверхности шейки матки на PAP-тест и пройти одно из ДНК исследований:
- ДНК-диагностика выявит вирус, его концентрацию и тип. Однако с её помощью невозможно узнать, начал ли вирус атаковать ткани шейки матки и насколько сильно такое поражение. Вирусная нагрузка даёт только косвенные сведения, поскольку развитие рака и других болезней зависит от иммунитета, состояния организма, сопутствующих заболеваний, типа вируса и других факторов. Поэтому даже низкая вирусная нагрузка не даст гарантию, что у пациентки не разовьется злокачественное новообразование шейки матки.
- PAP-тест выявит клетки, образующиеся при папилломавирусной инфекции. Это укажет на наличие вируса и факт его проникновения в ткани. Метод также покажет тяжесть поражения.
ДНК-диагностика
PAP-тест
Однако даже имея на руках результаты двух анализов, провести их интерпретацию самостоятельно практически невозможно. Для этого нужно провести осмотр пациентки и сопоставить картину состояния шейки с результатами диагностики. Это под силу только опытному врачу-гинекологу с хорошим багажом знаний и специальной аппаратурой. Поэтому, пытаясь самостоятельно расшифровать данные, можно пропустить опасное заболевание.
Для сдачи анализов на ВПЧ и их расшифровки нужно обратиться в Университетскую клинику.Здесь можно проверить состояние шейки матки с помощью видеокольпоскопа – прибора, позволяющего осмотреть ее поверхность вывести изображение на экран. Врачи клиники не только выявят наличие ВПЧ, но и проведут лечение вызванных им поражений-дисплазии, кондилом, папиллом.
Лечение проводится с помощью лазерных, радиоволновых, световых и других щадящих методов, минимальная травмирующих место удаления. После такой процедуры очень быстро восстанавливаются ткани, а на месте патологического очага не остаётся рубцов, стянутости и других остаточных явлений.
- Интерпретация результата анализов ВПЧ: расшифровка цитологии и гистологии
- Расшифровка анализа на ВПЧ: подробная интерпретация цитологического и гистологического анализов
- ДНК – анализы на ВПЧ
Поделиться ссылкой:
Источник
При обнаружении высокой концентрации онкогенных ВПЧ проводится анализ на экспрессию онкобелков р16 и Ki 67 – маркеров рака, появляющихся при делении клеток. Для его проведения используется материал соскобов, взятых для исследования на папилломавирусы.
Иммуноцитохимия позволяет выявить начавшееся предраковое или злокачественное перерождение клеток, сопровождающееся появлением онкобелков.
Иммуногистохимическое обнаружение онкобелков проводится по принципу антиген-антитело. Материал обрабатывают реактивами, содержащими антитела к белкам р16 и Ki 67, которые находят нужные белковые соединения и вступают с ними в реакцию. Затем подсчитывается процентное содержание измененных клеток.
Антиген-антитело
Процесс происходит в несколько этапов:
- Полученный материал промывают и фиксируют с помощью химических препаратов.
- Подготовленные образцы обрабатывают составами–иммуногистостейнерами, содержащими антитела к белкам (антигенам). В результате происходит реакция. В состав реактивов входят компоненты, заставляющие полученные соединения антиген- антитело светиться, что позволяет их обнаружить.
- С помощью лабораторного оборудования подсчитывают количество светящихся пораженных клеток с повышенным уровнем онкобелков.
- Определяют процентное соотношение здоровых клеток и тех, в которых увеличена концентрация онкобелков. Процесс называется индексом пролиферативной активности. Этот показатель указывается в бланке анализа.
Отдельно определяются экспрессия Ki 67 и р16. Хотя эти вещества наделены абсолютно противоположными функциями, повышение их экспрессии одинаково неблагоприятно.
Онкобелок Ki67 «включается» при клеточном делении, поэтому его называют маркером пролиферации. Поскольку злокачественные клетки бурно делятся, при развитии рака концентрация клеток с повышенным уровнем Ki67 увеличивается. Чем их больше, тем выше риск обнаружения онкологии. Высокие показатели могут указывать на наличие агрессивной опухоли.
| Экспрессия Ki67 | Вероятность обнаружения рака |
| Менее 25% | 16% |
| До 75% | 40% |
| Свыше 75% | 44% |
Белок Р16 также обнаруживается при раковых и предраковых патологиях. Задача этого белкового соединения – тормозить клеточное деление, поэтому его называют маркером антипролиферативной активности. Увеличивая концентрацию р16, организм пытается затормозить неконтролируемое деление диспластичных неправильно развитых клеток. Чем выше показатель экспрессии р16, тем тяжелее поражение клеток.
| Степень рака или предрака | Экспрессия р16 |
| Легкая дисплазия (цервикальная неоплазия) CIN1 | 16% |
| Тяжелая дисплазия, CIN 2,3 | 90% |
| Рак шейки матки | 100% |
Обнаружение одновременно обоих белков, называемое коэкспрессией – крайне неблагоприятный признак. Наличие одновременно двух веществ, одно из которых отвечает за ускорение клеточного деления, а другое – за его торможение, говорит о поломке механизма регулировки этого процесса. Практически всегда совместная экспрессия р16 и Ki 67 указывает на тяжелую дисплазию и онкологию.
В сомнительных случаях анализ через некоторое время пересдают заново. Увеличение показателя экспрессии указывает на высокую вероятность злокачественных процессов.
Исследование на онкобелки р16 и Ki 67 при обнаружении онкогенных вирусных штаммов дает возможность выявить не только возбудителя, но и обнаружить начавшиеся злокачественные процессы.
Что делать при плохом анализе на онкогенные штаммы ВПЧ
При высокой концентрации онкогенных штаммов и обнаружении онкобелков, назначаются:
- Мазок по Папаниколау с шейки матки на рак и предрак, если он до этого не был сделан. Исследование показывает перерождение тканей, которое может быть вызвано этими возбудителями.
- Расширенную кольпоскопию с проведением диагностических проб – уксусной или Шиллера. Во время процедуры врач смазывает поверхность шейки слабым раствором уксуса или йодными составами. При предраке и раке, вызванном папиломавирусом, на эпителии появится светлый участок с изменёнными расширенными сосудами. При подозрении на рак проводится биопсия – с подозрительных участков берутся образцы на гистологию – анализ состава ткани.
- Обследование на половые инфекции. Заражение папилломавирусом зачастую сочетается с инфицированием другими ЗППП, которые протекают скрыто и не дают симптомов.
- УЗИ малого таза, позволяющее выявить опухоли и другие патологии этой области.
- При необходимости осмотреть изнутри матку, уретру или мочевой пузырь назначается гистероскопия или цистоскопия.
Кольпоскопия
При обнаружении заболеваний проводится их лечение. Очаги перерождения (дисплазии) удаляют с помощью лазера, радиоволнового метода, фотодинамической терапии. Эти методики максимально щадяще воздействуют на ткани, что значительно ускоряет восстановление.
При обнаружении злокачественного новообразования пациента направляют на консультацию к онкологу для определения типа опухоли, ее распространённости, агрессивности и назначения лечения.
При повышенной вирусной нагрузке без изменений в тканях показано наблюдение. Нужно периодически сдавать анализ на наличие онкогенных ВПЧ и экспрессию онкобелков. Увеличение показателей указывает на начавшееся перерождение тканей. В этом случае нужно будет пройти повторную углубленную диагностику.
В Университетской клинике можно сдать не только анализ на ВПЧ высокого онкогенного риска, но и пройти всю необходимую дополнительную диагностику. Здесь имеются возможности для лечения дисплазии с помощью самых передовых – лазерной, фотодинамической, радиоволновый методик. Клиника оснащена современными пробами для осмотра матки, влагалища, мочевого пузыря, а также аппаратом УЗИ экспертного класса. Специалисты проведут лечение и проконтролируют его эффективность.
Поделиться ссылкой:
Источник
Вирус папилломы человека (папилломавирус, ВПЧ) – крайне распространённый опасный возбудитель, вызывающий рак шейки матки, прямой кишки, влагалища, вульвы, анального прохода, мужских половых органов.
Анализы на ВПЧ – папилломавирус
Последние научные исследования доказали причастность заражения вирусом к раку гортани, носоглотки и ротовой полости. Инфицирование вирусом также вызывает образование бородавок различного типа, в том числе кондилом на половых органах. Чтобы выявить ВПЧ, нужно сдать анализы в Университетской клинике.
Показания для сдачи анализов на ВПЧ
Скрининг со сдачей анализов на папилломавирус нужно периодически проходить каждой женщине.
Скрининг шейки матки – это профилактическое обследование для раннего выявления папилломавирусной инфекции и онкопатологий. Кроме обследований на ВПЧ, оно включает ещё и кольпоскопию – осмотр шейки матки с помощью прибора – кольпоскопа.
Кольпоскоп
Показания для срочных анализов на ВПЧ:
- Обнаружение патологических очагов на шейке матки, в уретре, аногенитальной области, возле заднего прохода. Поскольку похожие наросты могут вызывать различные заболевания, например, сифилис, мягкий шанкр, некоторые опухоли, больному назначаются анализа на папилломавирус. Обследование покажет наличие ВПЧ и его тип
- Уточнение генотипа вируса и определение его концентрации для правильного подбора лечения.
- Мониторинг эффективности терапии папилломавирусной инфекции.
Зачем нужны разные виды анализов на ВПЧ
Согласно данным научных исследований, папилломавирус находится в организме у 80% взрослого населения. Однако не всегда инфицирование приводит к онкологии. Все зависит от типа (штамма) возбудителя и его концентрации (вирусной нагрузки). Эти показатели определяют с помощью различных исследований
ВПЧ делятся на три группы:
- С низкой степенью онкогенности. В эту группу входят штаммы 6, 11, 13, 32,34, 40, 42- 44, 51, 54, 72, крайне редко становящиеся причиной рака. Однако они вызывают бородавки и болезни кожи. Поэтому высокая концентрация низкоонкогенных вирусов тоже опасна. При обнаружении бородавчатых наростов на коже и слизистых назначаются исследования на эти возбудители.
- С высокой степенью онкогенности. Наиболее часто приводящие к развитию рака. Самыми опасными считаются штаммы 16 и 18, но онкологию с достаточно высокой частотой вызывают и другие ВПЧ высокой степени онкогенности – 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59,68. Поэтому современные лабораторные методы направлены на обнаружение максимального количества вирусов этой группы.
- Со средней степенью онкогенности. Эти микроорганизмы могут вызвать рак, но происходит это реже, чем при заражении высокоонкогенными ВПЧ. Сюда относятся штаммы 26, 30, 35, 45, 52, 53, 56, 58,65.
Остальные ВПЧ плохо изучены или крайне редко вызывают болезни. Поэтому исследование на них проводить нецелесообразно.
Разнообразием этих микроорганизмов и обусловлено большое количество анализов на ВПЧ. Поэтому, решая какие из них лучше сдать, нужно оценить имеющиеся симптомы и жалобы. В любом случае решение нужно принимать вместе с врачом.
Существует комплексная диагностика, обнаруживающая сразу несколько типов вирусов. Она более удобна и информативна – чем глубже и разностороннее исследуется больной, тем выше вероятность обнаружения различных штаммов возбудителя.
Какие существуют анализы на ВПЧ
Все методы обнаружения папилломавируса можно разделить на несколько категорий:
- Качественные, выявляющие наличие и типы возбудителей, но не дающие возможность узнать их концентрацию. Обнаруживают заражение даже при отсутствии симптомов. В последнее время вытесняются количественными исследованиями, дающими больше информации.
- Количественные – показывают не только присутствие определённых типов (штаммов) ВПЧ, но и их концентрацию (вирусную нагрузку). Прекрасно подходят для скрининга, поскольку высокая концентрация папилломавируса даже при отсутствии жалоб представляет опасность и требует лечения. Многие пациенты предпочитают сдать такой анализ, справедливо считая, что это один из лучших методов диагностики ВПЧ.
- Цитологические (клеточные) исследования, при которых исследуются мазки с шейки матки. На вирусное заражение указывают изменения в клетках, вызванные вирусом. Штамм ВПЧ такие анализы не выявляют.
Поэтому идеальным вариантом будет проведение двух вариантов диагностики, обнаруживающих тип вируса и выявляющих вызванные им клеточные изменения.
ДНК анализ на ВПЧ – определение вируса по фрагментам генного материала. Амплификация мишени и сигнала
При проведении ДНК-исследования возбудителей обнаруживают по фрагментам их ДНК. Это дает возможность выявлять папилломавирусную инфекцию даже при небольшой концентрации патогенных микроорганизмов. Поэтому исследование диагностирует заражение на самой ранней стадии.
Для выявления ВПЧ берутся соскобы:
- С шейки матки и проходящего в ней цервикального канала.
- Со слизистой заднего свода влагалища, расположенного внизу под шейкой матки.
- Из мочеиспускательного канала – уретры. Соскоб берется при подозрении на предраковые и онкологические заболевания мочевыделительной системы. Такой анализ на ВПЧ лучше всего сдать мужчине, но проводят его и женщинам.
- При подозрении на предрак и рак прямой кишки. Соскоб берется со слизистой кишечника.
Соскоб на ВПЧ берут с помощью зонда или цитощетки. Затем нижнюю часть приспособления вместе со взятым материалом отделяют, помещают в транспортировочный раствор и доставляют в лабораторию. В лабораторных условиях проводятся различные исследования на папилломавирус.
Наиболее часто проводятся следующие варианты ДНК-диагностики:
- Исследование на ВПЧ штаммы 16-18, чаще всего вызывающие рак. Рекомендуется в качестве скрининга.
- Комплексные исследования, выявляющие сразу несколько штаммов вируса. Исследование назначают при изменениях тканей шейки матки, наружных половых органов и аногенитальной области, которые, возможно, вызваны этими возбудителями.
- Лабораторные исследования ВПЧ низкого онкогенного риска проводятся при обнаружении бородавок и других поражений кожи, подозрительных на папилломавирусную инфекцию.
В лаборатории полученный материал промывают, убирают примеси, а затем из него выделяют ДНК возбудителей. Поскольку полученное количество генетического материала недостаточно для исследования, его объем увеличивают – aмплифицируют. Для этого проводится репликация – копирование фрагментов ДНК. Процесс проводится до тех пор, пока не удаётся получить количество материала, необходимого для лабораторного исследования.
На таком методе, называемом амплификацией мишени, основана ПЦР-диагностика (полимеразная цепная реакция). Этот современный высокоинформативный метод выявляет разнообразные штаммы.
ДНК вируса соединяют с реактивами, вступающими с ним в реакцию. Получившиеся вещества называют гибридами. С помощью лабораторных методов определяют штаммы ВПЧ, на которые среагировали реактивы при получении гибридных соединений.
Современные реактивы представляют собой смесь веществ, вступающих в реакцию с ДНК, принадлежащих различным вирусным штаммам. Это дает возможность определить за одно исследование несколько типов ВПЧ.
Каждое из используемых веществ «подстроено» под конкретный вид папилломавируса и не реагирует на другие. Это исключает ложноположительную реакцию и позволяет достичь высокой точности.
Существует другая методика проведения ДНК-диагностики, называемая амплификацией сигнала, Digene-тестом, Digene Hybrid Capture II, двойной генной ловушкой. Для ее проведения взятые образцы смешивают с раствором, разрушающим вирус и освобождающим его ДНК. Обработанный препарат смешивается с реактивами с образованием соединений-гибридов. Этот этап – гибридный захват или гибридная ловушка, дал название методике.
ДНК диагностика
Гибриды отделяют и смешивают с реактивами, заставляющими их светиться. С помощью химических веществ и специальной аппаратуры свечение усиливают, то есть происходит амплификация сигнала. Очень точные приборы, которые могут различать световые сигналы, возникающие при обнаружении конкретного возбудителя, регистрируют их, выявляя заражение тем или иным штаммом.
С помощью обоих методов можно провести качественный анализ, выявив имеющиеся типы папилломавируса и количественный, определив их концентрацию. Для количественной оценки с помощью компьютерных программ анализируются объем ДНК вирусов и сила их свечения. Чем больше генного материала было найдено в образцах, и чем раньше прибор зарегистрировал свечение гибридов, тем выше концентрация вируса.
Что определяет ДНК-исследование, точность анализов
При проведении ДНК-исследования на ВПЧ определяются:
- Абсолютная микробная нагрузка – количество возбудителя в биоматериале. В норме она не должна превышать 3 Lg (абсолютных копий) /10^ 5 клеток. Если концентрация не превышает норму, считается, что вирус не обнаружен, поскольку микроорганизмы в столь малом количестве не опасны. Чем выше абсолютная микробная нагрузка, тем вероятнее возникновение онкологии, папиллом, кондилом и других последствий заражения.
- Относительная микробная нагрузка – отношение пораженных клеток к концентраций эпителия –ткани, которую поражает папилломавирус. В норме относительная нагрузка должна отсутствовать. Отрицательное значение указывает на наличие неактивных возбудителей, а положительный показатель означает распространение вируса и активную фазу заболевания.
ДНК анализы на ВПЧ обладают высокой степенью чувствительности вне зависимости от области, откуда был взят мазок.
| Область взятия мазка | Точность определения возбудителя, % | Точность определения типа (специфичности) возбудителя, % |
| Шейка матки и цервикальный канал | 98 – 100 | 99 – 100 |
| Другие области | 97,5 – 100 | 99 – 100 |
В бланке результатов исследования указываются выявленные штаммы вируса, абсолютная и относительная микробная нагрузка. Для расшифровки документа нужно обратиться к врачу. Специалист разъяснит полученные показатели, возможно, назначит дополнительные исследования и проведет лечение папилломавирусной инфекции. После окончания терапии нужно будет пройти повторное исследование, чтобы убедиться в излечении.
Анализ на антитела к ВПЧ
Любой микроорганизм, в том числе папилломавирус, иммунная система считает чужеродным белковым веществом – антигеном. Поэтому для его уничтожения вырабатываются органические соединения – антитела, задача которых инактивировать возбудителя. Именно на их обнаружении и основан этот лабораторный метод.
Для исследования берется кровь, из которой отделяется жидкая часть – плазма. Затем в нее добавляют вирусы папилломы быка, схожие по своей иммунной структуре с человеческими. При заражении ВПЧ происходит реакция антиген-антитело и образуются белковые комплексы, которые обнаруживают лабораторным путем. Так выявляют инфицирование ВПЧ типами 6, 11, 16, 18, 33.
Большой минус метода – позднее проявление реакции на возбудителя. Антитела образуются не сразу после заражения, поэтому какое-то время реакция будет ложноотрицательной. Но даже в разгар болезни антитела вырабатываются не всегда. Из-за этих недостатков исследование применяется редко.
Цитологический анализ на ВПЧ
Для цитологического (клеточного) исследования берётся мазок с поверхности шейки матки. Обязательно захватывается стык (зона трансформации) эпителия цервикального канала и наружной поверхности шейки. Тут чаще всего возникают предраковые изменения и злокачественные опухоли.
Традиционный метод цитологического исследования называется мазком по Папаниколау. В этом случае взятый образец наносится на предметное стекло, сушиться и доставляется в лабораторию.
В Университетской клинике применяется более современная жидкостная цитология. Мазок берется разборной цитощеткой, нижняя часть которой отделяется, и вместе со взятым образцом помещается в консервирующий раствор для доставки в лабораторию.
Цитощетка
В лабораторных условиях образцы наносят на предметные стёкла, окрашивают и осматривают под микроскопом. При поражении папилломавирусом обнаруживаются измененные клеточные элементы, которых в норме быть не должно.
| Патологические изменения в мазках при ВПЧ- инфекции | Характеристика клеток, обнаруживаемых при ВПЧ- инфекции |
| Койлоциты | Клетки с неправильно развитыми деформированными ядрами, окруженными зоной просветления – гало. Их окрашенная жидкая часть – цитоплазма, имеет пятнистую окраску, состоящую из скоплений частиц вируса – вирионов. |
| Дискератоциты | Плоские плотные клетки, содержащие белок кератин, которого в норме быть не должно. Могут иметь различную степень ороговения – слабую (паракератоз), среднюю (гиперкератоз), значительную – акантоз. Все эти варианты указывают на заражение ВПЧ. |
| Фигуры атипичного митоза | Делящиеся клетки с нарушенным процессом деления. |
| Атипия | Неправильно развитые клетки – слишком большие или маленькие, деформированные, уродливые, имеющие неправильное строение. |
| Полиморфизм | Клетки, происходящее из одной ткани имеют разную форму, размер и структуру. |
Обнаружение неправильно развитых клеток, атипичного митоза и полиморфизма указывает на предрак, а возможно, даже на начавшееся развитие раковой опухоли. Поэтому при таком результате требуется дополнительное углубленное исследование для исключения онкологии.
Сравнительная характеристика анализов на ВПЧ
| Вид диагностики | Преимущества | Недостатки |
| Тест по Папаниколау (Pap-тест) | Низкая цена | Чувствительность не более 89%, отсутствие возможности определить тип вируса. |
| Жидкостная цитология | Очень высокая чувствительность, возможность проведения нескольких исследований на основе одного образца. Очень хороший метод диагностики ВПЧ | Более высокая цена по сравнению с традиционным «сухим» методом. Не определяет штамм и концентрацию вируса. |
| Качественный анализ | С высокой точностью выявляет разнообразные штаммы вирусов | Не показывает вирусную нагрузку. |
| Количественное исследование | С высокой точностью показывает присутствие вируса и его количество | Высокая цена. |
| Иммуноферментный метод (обнаружение антител к вирусу) | – | Точность составляет не более 70%. Не показывает «свежее» заражение папилломавирусом. |
Как с помощью анализов точно определить ВПЧ
Нужно пройти осмотр у врача, который выявит патологические очаги, возможно вызванные папилломавирусом. Берётся соскоб на ВПЧ и мазок на цитологию с шейки матки из цервикального канала, влагалища, уретры, прямой кишки.
Такое комплексное исследование выявит тип вируса, степень его онкогенности, начавшееся предраковое перерождение и онкологию до появления симптомов.
Что делать при плохих анализах на ВПЧ
С результатами нужно обратиться к врачу, который приведет их расшифровку, назначит необходимое исследование и лечение.
При плохих результатах цитологического исследования показана биопсия – взятие образцов с подозрительных участков на гистологию – исследование ткани. Это позволяет исключить злокачественное перерождение, а при обнаружении онкологии – выявить тип рака, чтобы подобрать наиболее подходящее лечение.
В качестве дополнительных уточняющих исследований врач назначаются:
- УЗИ малого таза, выявляющее новообразования.
- Крови на онкомаркеры – вещества, концентрация которых увеличивается при онкологии.
- Обследование на половые инфекции. Инфицирование папилломавирусом часто сопровождается наличием ЗППП, имеющих скрытое течение.
- Гистероскопия – осмотр внутренней поверхности матки с помощью прибора – гистероскопа Цистоскопия – осмотр мочевого пузыря прибором – цистоскопом.
При обнаружении дисплазии шейки матки, кондилом и папиллом проводится удаление патологических очагов с помощью лазера или радионожа. Полученные образцы отправляют в лабораторию для исследования, чтобы исключить онкологию.
Поскольку специфического лечения, направленного против папилломавируса, не существует, пациентам назначают противовирусные препараты общего действия, иммуностимулирующие и общеукрепляющие средства. При сопутствующих инфекционных и воспалительных процессах назначают антибиотики и противовоспалительные препараты. После окончания лечения нужно снова сдать анализы на ВПЧ, чтобы убедиться в излеченности.
В Университетской клинике имеется все необходимое лечебно-диагностическое оборудование, позволяющее выявлять ВПЧ и вызванные им поражения тканей. Здесь можно пройти видеокольпоскопию, гистероскопию, цистоскопию, чтобы выявить возможные очаги рака и предрака, вызванные папилломавирусной инфекцией.
В клинике имеется радиоволн?