Вирус папилломы человека строение

впч

Вирус папилломы человека (ВПЧ) – собирательное название для группы ДНК-вирусов, передающихся от человека к человеку и провоцирующих развитие доброкачественных новообразований – папиллом. Некоторые разновидности являются онкогенными (то есть повышают риск возникновения злокачественных опухолей). Наиболее часто ВПЧ связывают с раком шейки матки, ежегодно уносящим тысячи женских жизней по всему миру. Однако эти вирусы влияют на развитие и других онкологических заболеваний: не только у женщин, но и у мужчин.

ВПЧ длительное время не проявляет себя симптомами: пациенты часто о нем узнают уже лишь тогда, когда развиваются предраковые состояния или рак. ВПЧ представляет угрозу для пациентов любого пола и возраста, включая маленьких детей. Но все же его главной «целевой аудиторией» являются люди 15-30 лет: они ведут активную половую жизнь, не всегда задумываясь о мерах предосторожности, а в большинстве случаев ВПЧ передается именно половым путем.

Чтобы воздействие вируса на организм не зашло так далеко, рекомендуется регулярно проверять состояние своего здоровья: для исключения патологий, которые он способен вызвать. Также существуют анализы на ВПЧ, позволяющие выявить наличие онкогенных штаммов. Позаботьтесь о своем здоровье прямо сейчас: запишитесь на прием в Поликлинике Отрадное и посетите консультацию врача без необходимости ждать в очередях или подстраиваться под неудобное для вас время

Что такое ВПЧ

Папилломавирусы человека, попадая в организм через микротравмы кожи, внедряются в клетки базального слоя эпителия. ВПЧ может существовать в любых слоях эпидермиса. Однако его размножение происходит исключительно в базальном слое.

Развитие вируса происходит в 2 стадии:

Репродуктивная – вирус проникает в клетку, не затрагивая ее хромосомы, и размножается.
Интегративная – ВПЧ внедряется в геном инфицированной клетки.

Именно во время второй стадии вирус трансформирует клетки. Они начинают активно делиться, и возникают опухолевидные образования – папилломы. Это сосочковые разрастания, выступающие над поверхностью кожного покрова (поэтому они так и называются: papilloma – от латинского papilla – сосок и греческого oma – опухоль). Вторая стадия наступает не всегда. Вирус, находясь в первой стадии развития, способен регрессировать (покинуть организм). Однако даже если у пациента не наблюдается патологических изменений, он является носителем ВПЧ и способен заражать других людей.

Инкубационный период может длиться от 3 недель до года. В среднем он составляет 3 месяца. В некоторых случаях сначала появляются негенитальные формы папиллом, а затем новообразования возникают на половых органах.

впч

В большинстве случаев в течение 2-х лет организм справляется с вирусом. Однако может произойти повторное заражение – этим же или другим штаммом. Также папилломы или другие кожные проявления, способны регрессировать через 6-8 месяцев (постепенно уменьшаться и впоследствии исчезнуть). Это происходит, когда иммунитет подавляет вирус и «выживает» его из клеток.

Чаще всего вирус ВПЧ поражает кожу и слизистые оболочки:

Аногенитальной области.
Верхних дыхательных путей.
Ротовой полости.
Бронхов.
Конъюктивы.
Прямой кишки.
Пищевода.

Типы ВПЧ

Первый вирус папилломы человека (Human papilloma virus, HPV) был выделен в 1971 году. А ученому Харальду цур Хаузену удалось выявить и доказать связь между ВПЧ и раком шейки матки. Впоследствии за свои открытия он получил Нобелевскую премию.

На сегодняшний день известно около 600 различных штаммов ВПЧ. Одни провоцируют возникновение бородавок, другие – кондилом, третьи – папиллом. Также есть среди ВПЧ типы, влияющие на развитие раковых опухолей. Их называют онкогенными. К счастью, их не так много. Они могут обладать низким, средним или высоким онкогенным потенциалом:

Низкой онкогенностью отличаются штаммы 6, 11, 40, 42, 43, 44, 54, 61, 70, 72, 81.
Средняя онкогенность у типов 26, 31, 33, 35, 51, 52, 53, 58, 66.
Высокий онкогенный потенциал у штаммов 16, 18, 39, 45, 56, 59, 68, 73, 82.

Рак шейки матки в большинстве случаев вызывается типами 16 и 18.

Справка! Наличие онкогенного типа ВПЧ в организме не означает, что человек «приговорен» к раку. Наличие вируса повышает риск развития онкологических заболеваний, но не является единственной причиной их возникновения. Если у пациента выявлен онкогенный штамм ВПЧ, ему просто необходимо внимательнее следить за состоянием своего здоровья, регулярно проходить профилактические исследования. При необходимости врач назначит ему соответствующую терапию.

Половую систему женщин и мужчин способны поражать около 40 типов папилломавирусов. Результатом их активности являются не только онкологические заболевания, но также генитальные бородавки или кондиломы.

Справка! Раковые опухоли развиваются медленно: в течение 5-30 лет после заражения папилломавирусом. Им предшествуют предраковые состояния (доброкачественные новообразования, способные перерождаться в злокачественные). Именно поэтому так важно регулярно проходить профилактические осмотры. И предраковые состояния, и даже рак на начальных стадиях прекрасно поддаются лечению, и можно избежать опасных последствий.

Пути передачи ВПЧ

Главным «условием» заражения является наличие микроповреждений (ранок, трещинок, царапин) кожи или слизистых оболочек. Именно они служат «вратами» для ВПЧ.

Чаще всего передача вируса происходит при соприкосновении кожи или слизистых оболочек двух людей. Поэтому основным путем папилломавирусов является половой контакт. Причем использование презервативов не исключает возможность заражения. Вирус может быть передан при оральном сексе, во время которого далеко не всегда пользуются контрацепцией. К тому же презерватив покрывает не всю поверхность полового члена, и нередко его надевают уже в середине полового акта. ВПЧ можно заразиться и при поцелуе.

Также ВПЧ может передаваться:

От матери к ребенку при прохождении малыша через родовые пути.
В быту: при использовании чужих средств гигиены (полотенец, зубных щеток, бритвенных принадлежностей).
В общественных местах: банях, спортзалах, бассейнах.

Справка! Срок выживания папилломавирусов во внешней среде недолог. Поэтому риск бытового заражения хоть и существует, но он значительно ниже, чем при половом контакте.

Также возможно самозаражение: перенос вируса с одного участка тела на другой во время депиляции, расчесывании кожи, обкусывании ногтей.

Заражение при контакте с вирусом происходит не во всех случаях. Риск повышают следующие факторы:

Снижение иммунитета.
Вредные привычки: курение, злоупотребление спиртным.
Стрессы.
Наличие инфекций, передаваемых половым путем.
Заболевания мочевыделительной системы.
Травмы кожи и слизистых оболочек.
Иммунодефицитные состояния.
Длительный прием гормональных контрацептивов.

Справка! Для женщин онкогенные штаммы ВПЧ опаснее, чем для мужчин, так как они заражаются ими чаще.

ВПЧ: симптомы

Папилломавирусы способны на протяжении длительного времени абсолютно не проявлять себя симптомами. Обычно о наличии ВПЧ пациент узнает уже при развитии его последствий: появления бородавок, папиллом, кондилом. В некоторых случаях о наличии вируса могут говорить следующие признаки:

Покраснения, кожные новообразования (чаще всего в области половых органов);
Кожный зуд.
Боли и прочий дискомфорт во время или после полового акта.

Какие заболевания может вызвать ВПЧ

Папилломавирусы, прежде всего, провоцируют рост папиллом, бородавок и кондилом у пациентов обоих полов. Все вышеперечисленные новообразования способны возникнуть на любом участке тела. Однако чаще всего они поражают половые органы и анальную область. У женщин они возникают в области вульвы, шейки матки, влагалища. У мужчин – мошонку, головку члена, крайнюю плоть. У пациентов обоих полов новообразования часто появляются в области заднего прохода.

Также бородавки нередко возникают на подошвах, гортани, голосовых связках. У папиллом (сосочковидных образований телесного цвета) нет «излюбленного места» – они способны появиться на туловище, шее, лице, руках и ногах. У детей и подростков чаще всего встречаются плоские бородавки (их еще называют юношескими или ювенильными). Это небольшие (3-5 мм) темные новообразования, немного выступающие над поверхностью кожи. Чаще всего они возникают на тыльной стороне кистей, лице, ногах.

впч

Что касается онкологических заболеваний, то с ВПЧ у большинства пациентов ассоциируется, в первую очередь, рак шейки матки. Действительно, эта патология является очень распространенной в наше время. Однако у женщин ВПЧ также нередко провоцирует развитие рака влагалища и вульвы (65-70% случаев), у мужчин – рака полового члена (50% случаев). Также и у женщин, и у мужчин папилломавирусы могут способствовать возникновению злокачественных опухолей:

прямой кишки;
полости рта;
гортани.

У детей ВПЧ, как правило, проявляется ростом папиллом на фоне снижения иммунитета вследствие перенесенных заболеваний, обычно это вирусные или бактериальные инфекции. Также папилломавирусы поражают маленьких пациентов, страдающих аллергическими реакциями или частыми простудными заболеваниями.

ВПЧ и беременность

Папилломавирусы негативно влияют на женскую фертильность. При их наличии вероятность наступления беременности снижается вдвое, так как ВПЧ способен препятствовать имплантации оплодотворенной яйцеклетки. Если вирусом заражен и партнер (что бывает в 65-70% случаев), то возможность зачатия уменьшается еще больше. ВПЧ оказывает негативное влияние на подвижность сперматозоидов.

При наступлении беременности папилломавирус повышает риск развития:

Мало- или многоводия.
Хронической плацентарной недостаточности.
Также ВПЧ может спровоцировать невынашивание беременности.

Поэтому беременным назначается щадящая медикаментозная терапия, позволяющая значительно снизить все вышеперечисленные риски.

При прохождении ребенка по родовым путям есть риск его заражения. Поэтому женщинам с ВПЧ предпочтительнее рожать путем кесарева сечения – риск передачи вируса снижается в 5 раз.

Изменения гормонального фона провоцируют быстрый рост остроконечных кондилом на половых органах. Они могут срастаться, что способно вызвать затруднения актов мочеиспускания и дефекации, доставлять неприятные ощущения при ходьбе, кровотечения. При родах новообразования легко травмируются. Также они могут затруднить прохождение ребенка по родовым путям. Чтобы избежать всего этого, остроконечные генитальные кондиломы лечат на ранних сроках беременности. Применяются такие методы, как криодеструкция, лазерная хирургия и т.д.

Диагностика

впч

Для диагностики ВПЧ сначала обращаются к терапевту. В зависимости от проявлений вируса, он направит пациента на диагностические исследования и к узкому специалисту (гинекологу, урологу, дерматологу, онкологу, проктологу и т.д.).

И женщинам, и мужчинам могут быть назначены такие исследования, как:

Иммуноферментный анализ крови – по его результатам нельзя определить концентрацию и онкогенность вируса, но можно выявить антитела к нему, метод идеально подходит для ранней диагностики, когда еще не появились симптомы.
ПЦР-диагностика – позволяет выявить ДНК ВПЧ, то есть позволяет точно узнать, есть ли в организме вирус или нет; для анализа берут кровь, слюну, выделения из половых органов и т.д.
Digene-тест – позволяет оценить степень онкогенности штамма, установить количество вируса в организме; биоматериалом служит кусочек ткани, соскоб из цервикального канала, влагалища или уретры.

Женщинам назначают следующие виды обследования:

Цитологическое исследование (ПАП-тест) – изучение мазка из влагалища под микроскопом с целью выявления измененных вирусом клеток.
Кольпоскопию – осмотр шейки матки с помощью прибора кольпоскопа, эта процедура назначается пациентке, если по результатам цитологического исследования были обнаружены измененные клетки.

Лечение

Специфического лечения ВПЧ (то есть направленного на его уничтожение) не существует. Однако можно принять меры, подавляющие активность вируса и повышающие вероятность самоизлечения. Пациенту назначают:

Витамины.
Иммуномодуляторы.
Противовирусные препараты.

Также проводится симптоматическое лечение – удаление новообразований. Пытаться лечить кондиломы, папилломы и бородавки народными средствами ни в коем случае нельзя. Есть риск спровоцировать развитие вторичной инфекции или перерождение доброкачественной опухоли в злокачественную.

Для устранения новообразований применяются следующие методы:

Удаление с помощью скальпеля.
Криодеструкция (замораживание с помощью жидкого азота).
Удаление радионожом.
Лазерное удаление.
Электрокоагуляция.

Метод выбирается врачом в зависимости от характера и расположения новообразования, а также состояния организма пациента.

Профилактика

впч

К профилактическим методам относятся ведение здорового образа жизни и регулярное укрепление иммунитета с помощью полноценного и разнообразного питания, умеренной физической активности, качественного отдыха. Важно соблюдать правила личной гигиены, не пользоваться чужими принадлежностями. Во избежание риска заражения следует отказаться от случайных половых связей и использовать барьерные средства контрацепции.

Также в наше время есть возможность вакцинации от некоторых высокоонкогенных штаммов ВПЧ. Прививки рекомендуют делать в возрасте от 9 до 26 лет (оптимальный возраст – 11-12 лет). Женщины могут пройти вакцинацию и после 26 лет, но только лишь если гинеколог считает, что есть показания. Следует иметь в виду, что прививка не излечивает от уже имеющегося в организма вируса, а предотвращает заражение некоторыми особо опасными его типами.

Источник

Вирусы папилломы (papilloma viruses) заражают клетки кожи и слизистых оболочек — кератиноциты, которые служат основным механическим барьером между внешней средой и внутренней средой организма. Эта группа вирусов очень разнообразна, и многие ее представители не вызывают никаких симптомов. Однако патогенные представители могут приводить не только к образованию папиллом и бородавок, но и к злокачественным опухолям.

История и распространенность ВПЧ

Бородавки и кожные заболевания упоминаются и описываются начиная с самых древних литературных источников. Первые подробные описания кожных новообразований составил древнеримский естествоиспытатель и врач Авл Корнелий Цельс, живший на рубеже старой и новой эры [7]. Предположения о том, что некоторые бородавки могут передаваться инфекционными агентами возникло еще раньше. Показать, что этими агентами являются вирусы удалось в начале ХХвека (обзорная информация по ссылке 4). Первый вирус папилломы был выделен в 1933 Ричардом Шоупом [8], американским вирусологом, который также впервые выделил и вирус гриппа [9].

Папилломавирусы втречаются у млекопитающих и существенно менее распространены среди птиц. Эволюционная история папилломавирусов началась тогда, когда появились первые высшие позвоночные (амниоты, к которым относятся пресмыкающиеся, птицы и млекопитающие) [10]. Более подходящими хозяевами для этой группы вирусов, в виду строения кожного покрова, оказались млекопитающие, у которых они представлены множеством подсемейств и родов [11]. Родство вирусов папилломы с другими семействами ДНК-вирусов (например,полиомавирусами) пока не продемонстрировано достаточно убедительно [12].

Человека могут заражать более 100 штаммов папилломавирусов, которые делят на штаммы с высоким либо низким риском возникновения рака. При этом низкопатогенных разновидностей существенно больше.

К злокачественным новообразованиям (в это касается рака шейки матки и аногенитальной зоны) приводят всего 18 штаммов. Передаются вирусы папилломы человека(ВПЧ) в основном половым путем и при контакте слизистых.

Считается, что ВПЧ низкого риска продуцируют больше вирионов, лучше распространяются, хотя и элиминируются из организма за один-два года, или даже быстрее [13]. По сравнению с ними, штаммы высокого риска заражают меньшее количество людей, но и иммунной системе с ними справиться сложнее [14]. Самыми канцерогенными являются штаммы ВПЧ 16 и ВПЧ 18, а за возникновение бородавок в аногенитальной зоне в 90% случаев ответственны штаммы ВПЧ 6 и ВПЧ 11 [15]. Именно эти представители папилломавирусов привлекают наибольшее внимание исследователей [16] [17].

Строение и биология вируса

Папилломавирусы имеют сравнительно маленькие вирионы, лишенные мембранной оболочки. Их диаметр около 30 нм. Это примерно в четыре раза меньше диаметра ВИЧ или гриппа, имеющих мембранную оболочку, происходящую из мембраны зараженной клетки. Геном папилломавирусов представлен кольцевой двуцепочечной молекулой ДНК, которая упакована при помощи гистонов — клеточных белков, участвующих в компактизации ДНК в ядре. Геном папилломавирусов кодирует два типа белков. Ранние белки (early proteins, E-proteins) осуществляют регуляторные функции, обеспечивают размножение вируса и, в ряде случаев, ответственны за злокачественное перерождение клеток. Поздние белки (late proteins, L-proteins) выполняют структурную функцию, формируя капсид вирионов.

Папилломавирусы непросто культивировать в лабораторных условиях, так как нативные частицы образуются либо в живых организмах, либо в сложных органотипических клеточных культурах, в которых клетки проходят стадии дифференцировки, аналогичные существующим в живом организме [18, 19 и 20].

Жизненный цикл вирусов папилломы привязан к стадиям развития кератиноцитов. Кератиноциты — это клетки, из которых в основном состоят эпидермис, верхний слой кожи, и слоистый эпителий слизистых оболочек.

Активно делящиеся молодые кератиноциты выстилают базальную мембрану, находящуюся под верхними слоями эпидермиса, а по мере созревания и дифференцировки кератиноциты вытесняются к поверхности кожи. Вирусные частицы заражают еще не дифференциированные клетки, а новые частицы образуются в кератиноцитах, достигших терминальной стадии дифференцировки.

Ранние белки папилломавирусов обеспечивают нужное содержание ДНК вируса в ядре клетки и координируют экспрессию его генов. Белки E1 и E2 образуют комплекс с ДНК вируса, привлекая клеточные системы репликации. За канцерогенный эффект у штаммов ВПЧ высокого риска ответственны ранние белки E6 и E7. E6 способен связываться с опухолевым супрессором р53, провоцируя его убиквитинизацию и уничтожение [21]. E7 у таких штаммов связывается и влияет на работу целого ряда белков, среди которых регуляторные белки и опухолевые супрессоры, такие как ретинобластомный фактор. Активность E6 и E7 приводит к неконтролируемому клеточному делению [22 и 18].

Поздние белки ВПЧ нужны для образования капсида и упаковки ДНК вируса. Основным структурным компонентом капсида папилломавирусов является белок L1, который образует пентамеры [23]. В состав одного капсида входит 72 пентамера. Капсид папилломавирусов имеет сферическую форму, однако в действительности он представляет собой икосаэдр с триангуляционным числом равным семи. Сферическая структура образуется не из комбинации гексамеров и пентамеров (как, например, в футбольном мяче), а из двух типов пентамеров. 60 пентамеров капсида ВПЧ образуют по 6 связей с соседними пентамерами, а 12 из них — по пять [2, глава 3]. Интересно, что строение L1 напоминает строение клеточных белков нуклеоплазминов, регулирующих упаковку нуклеосом [24]. На данный момент нет точного понимания, имеют ли L1 и нуклеоплазмины общего предка, или их схожесть результат конвергентной эволюции.

Минорный белок L2 также является структурным компонентом вирусной частицы. Один L2 приходится на один пентамер L1 [4]. По всей видимости, это белок важен для привлечения вирусных ДНК к собирающимся частицам. Существует гипотеза, что L1 и L2 могут взаимодействовать не непосредственно с нуклеиновой кислотой вируса, а с гистонами, которые ее компактизуют [4].

Каким конкретно образом ДНК уложена внутри вирсуной частицы, тоже не описано окончательно. Известно что в вирусоподобные частицы ВПЧ может быть упакована любая ДНК короче 8 тысяч пар нуклеотидов, что открывет перспективы для использовния ВПЧ в качестве трансформационных векторов. Интересно, что в распаковке капсида папилломавирусов участвует циклофилин — клеточный белок, также способствующий распаковке капсида, например ВИЧ [25].

Вакцины против ВПЧ

В настоящее время активно разрабатываются и внедряются вакцины против папилломавирусов. В основном они создаются против наиболее распространенных канцерогенных штаммов ВПЧ 16 и ВПЧ 18, а зтакже против ВПЧ 6 и ВПЧ 11, основной причины появления бородавок.

Имеющиеся вакцины от вирусов папилломы человека — это триумф прикладной структурной вирусологии. Однако, доступные вакцины, сделанные на основе рекомбинантных вирусоподобных частиц, собранных из белка основного капсидного L1, не защищают от всех типов патогенных ВПЧ. К счастью, новое поколение вакцин от ВПЧ, нацеленных на «Ахиллесову пяту» вируса — консервативные эпитопы, присутствующие на минорном белке L2, обещает предоставить широкую защиту от всех ВПЧ, включая все папилломавирусы, вызывающие рак, также как и вирусы, вызывающие доброкачественные кожные новообразования. Имеющиеся знания о структуре, динамике и функциях L2 все еще весьма ограничены. Эта информация крайне необходима для разработки универсальной вакцины от ВПЧ.
Доктор Кристофер Бак. Национальный института рака, США

Интерес к разработке вакцин был подогрет тем, что исследование связи папилломовирусов с раком шейки матки в 2008 году было удостоено Нобелевской премии в области физиологии и медицины. Немецкий ученый Харальд зур Хаузен (Harald zur Hausen) показал, что папилломавирусы являются причиной практически всех случаев рака шейки матки, второго по распространенности рака у женщин [1].

Интересно, что зур Хаузен исследовал среди прочего клетки культуры HeLa — первые человеческие клетки, которые удалось культивировать в 1951 году группе американских ученых [26]. Источником этой важнейшей клеточной линии стали клетки злокачественной опухоли американской гражданки Генриэтты Лакс, страдавшей раком шейки матки. Зур Хаузену удалось получить доступ к результатам биопсии Генриэтты и показать что женщина была заражена сразу несколькими разновидностями ВПЧ 18 одновременно, что и стало причиной возникновения у нее рака шейки матки. Эти важные исследования, а также история получения самой распространенной культуры человеческих клеток описаны в популярной форме в книге Ребекки Склут «Бессмертная жизнь Генриеэтты Лакс».

Показать ссылки

zur Hausen H., Virology. 2009 Feb 20;384(2):260-5. Epub 2009 Jan 8.
Rossmann W.G. and Rao V.B. ed., ISBN-10: 1461409799; ISBN-13: 978-1461409793; Dec 26, 2011
Belnap D.M., Olson N.H. et al., J Mol Biol. 1996 Jun 7;259(2):249-63.
Buck C.B. and Trus B.L., Adv Exp Med Biol. 2012;726:403-22.
Matsukura T., Kanda T. et al., J Virol. 1986 Jun;58(3):979-82.
Favre M., Breitburd F. et al., J Virol. 1977 Mar;21(3):1205-9.
Lutzner MA., Arch Dermatol. 1983 Aug;119(8):631-5.
Shope R.E. and Hurst E.W., J Exp Med. 1933 Oct 31;58(5):607-24.
Shope R.E., J Exp Med. 1931 Jul 31;54(3):373-85.
Bravo I.G. and Alonso A., Virus Genes. 2007 Jun;34(3):249-62. Epub 2006 Aug 22.
Bravo I.G., de Sanjosé S. et al., Trends Microbiol. 2010 Oct;18(10):432-8. Epub 2010 Aug 24.
Domingo E., Parrish C.R. et al. ed., ISBN-10: 012374153X; ISBN-13: 978-0123741530; Sep 26, 2008
Giuliano A.R., Lu B. et al., J Infect Dis. 2008 Sep 15;198(6):827-35.
Orlando P.A., Gatenby R.A. et al., J Infect Dis. 2012 Jan 15;205(2):272-9. Epub 2011 Nov 16.
Gravitt P.E., J Clin Invest. 2011 Dec;121(12):4593-9. doi: 10.1172/JCI57149. Epub 2011 Dec 1.
Calleja-Macias I.E., Villa L.L. et al., J Virol. 2005 Nov;79(21):13630-40.
Burk R.D., Chen Z. et al., Acta Dermatovenerol Alp Panonica Adriat. 2011 Sep;20(3):113-23.
Conway M.J. and Meyers C., J Dent Res. 2009 Apr;88(4):307-17.
Meyers C., Frattini M.G. et al., Science. 1992 Aug 14;257(5072):971-3.
McLaughlin-Drubin M.E. and Meyers C., Methods Mol Med. 2005;119:171-86.
Rolfe M., Beer-Romero P. et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 1995 Apr 11;92(8):3264-8.
Dyson N., Howley P.M. et al., Science. 1989 Feb 17;243(4893):934-7.
Chen X.S., Casini G. et al., J Mol Biol. 2001 Mar 16;307(1):173-82.
Ramos I., Martín-Benito J. et al.,, J Biol Chem. 2010 Oct 29;285(44):33771-8. Epub 2010 Aug 9.
Luban J., Cell. 1996 Dec 27;87(7):1157-9.
Scherer W.F., Syverton J.T. et al, J Exp Med. 1953 May;97(5):695-710.