Пцр впч у женщин
Автор статьи
Практикующий-дерматовенеролог, окончил Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова.
Вирус папилломы человека (ВПЧ) – распространенное заболевание, протекание которого носит хронический характер и чревато рецидивами. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – один из самых современных способов диагностики папилломавируса. Этот способ считается надежным и позволяет выявить не только наличие вируса в организме, но также его тип и количество. ПЦР чувствителен даже к неактивной форме вируса, при которой отсутствуют внешние проявления в виде папиллом и кондилом.
Общие сведения
Анализ строится на исследовании ДНК пациента с целью обнаружения в ней присутствия чужеродных элементов. Любая ДНК строится на основе четырех нуклеотидов, располагающихся в определенной последовательности. Когда в организм попадает вирус, происходит изменение порядка в этой цепи, что позволяет оперативно отследить деятельность даже незначительных инородных частиц. Метод ПЦР диагностики проводится с использованием вирусных частиц, что обусловливает быстрое деление клеток.
Такая диагностика способна отследить активность ВПЧ не только в момент его протекания в скрытой фазе, но и в инкубационный период, когда папилломавирус еще не успел заявить о себе. ПЦР позволяет выявить:
- наличие ВПЧ;
- штаммы, которыми инфицирован больной;
- количественное содержание вируса в организме.
Большинство людей инфицированы папилломавирусом, однако сильный иммунитет подавляет его проявления и не дает размножаться. Поэтому обнаружение ВПЧ качественным методом может быть не всегда оправдано. Это не рационально в случае, если вирус присутствует в организме, но его воздействие минимально и никак не вредит человеку. Тем не менее качественный анализ покажет положительный результат, чем может вести пациента в замешательство.
Поэтому для диагностики чаще всего применяют количественный метод, позволяющий отследить количество вируса в организме и определить, насколько опасна его деятельность. Кроме того, важно установить штамм ВПЧ. Они делятся по степени онкогенности: одни совершенно безопасны и способны вызывать только косметические проблемы, другие могут стать причиной возникновения рака.
Каждая ситуация требует индивидуального подхода, поэтому прежде чем сдавать анализ, желательно проконсультироваться с врачом. Он подскажет, каким методом и на какие штаммы лучше всего проверяться, исходя из состояния пациента.
Показания для анализа
Инфицирование ВПЧ возможно только при непосредственном контакте с зараженным человеком. Вирус попадает в кровь и начинает размножение в области верхних слоев кожи, что обусловливает появление его характерных признаков – возникновение папиллом и кондилом. 
ВПЧ распространяется следующими путями:
- при незащищенных половых контактах;
- при естественных родах от инфицированной матери к ребенку;
- контактно-бытовым путем через предметы общего пользования, личные вещи, одежду и т.д.;
- во время тесного контакта с кожей больного.
Чаще всего диагностировать ВПЧ приходят люди, у которых видны внешние признаки болезни. Однако если они никак не проявляются, это не является гарантией отсутствия вируса. Он также может присутствовать в крови и развиваться бессимптомно. Это особенно характерно для высокоонкогенных типов вируса: 16 и 18 штамма, которые провоцируют возникновение рака. Направление на диагностику этих типов обычно происходит при обращении к профильным специалистам: гинекологу и урологу. 
Преимущества метода
ПЦР считается одним из главных методов диагностики и остается самым востребованным среди врачей. Он используется не только для выявления ВПЧ, но также помогает обнаруживать другие заболевания, передающиеся половым путем, гепатиты, скрытые инфекции и т.д. ПЦР диагностика обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами выявления заболеваний. Среди них:
- Высокая специфичность. Тест помогает с большой вероятностью отделить следы чужеродной ДНК от ДНК человека в рамках собранного материала.
- Высокая производительность. ПЦР представляет собой автоматизированный процесс, помогающий провести диагностику непосредственно в день сдачи анализа. Такая скорость исследования позволяет пациенту не волноваться о результате на протяжении долгого времени и получить результат уже через несколько дней.
- Возможность сделать сразу несколько анализов. На основании одного собранного образца можно провести диагностику для выявления нескольких заболеваний. Например, одновременно можно выявить возбудителя хламидиоза и гонореи. При этом такая процедура не сможет отрицательно повлиять на достоверность результата.
- Высокая чувствительность. Тест позволяет обнаружить деятельность вируса даже в инкубационный период, когда его концентрация очень мало. Это поможет предупредить развитие патологического процесса и начать своевременное лечение.
Недостатки метода
Существуют, однако, и некоторые отрицательные моменты в проведении ПЦР диагностики. Главный из них – возможность получения ложноположительного результата. Это происходит в случае, если лечение уже проведено, инфекция побеждена, но мертвые клетки еще остаются внутри тканей. Для обновления клеток необходимо время.
Если провести анализ раньше 2-3 месяцев, ПЦР может показать положительный результат, в действительности принимая уже мертвые клетки за живые. Метод не делает различий между ними, он нацелен на поиск ДНК вируса, которую может найти даже в уже отмерших клетках. Все это приводит к получению ложноположительного результата. Избежать такой ситуации можно, если сдавать анализ в установленный лечащим врачом срок.
Также существует риск ложноотрицательного результата. В этом случае пациент никак не может повлиять на качество диагностики, так как ложноотрицательный анализ – просчет лаборатории. Он может возникнуть если:
- собранный материал неправильно транспортировался и хранился;
- нарушается стерильность, и в полученные пробы попадают другие микроорганизмы;
- реагенты были непригодными.
Для того чтобы исключить возможность получения ложноотрицательного результата, необходимо выбирать проверенную лабораторию с квалифицированным персоналом.
Виды методик
В рамках проведения ПЦР диагностики разработаны четыре метода тестирования. Каждый из них имеет свои особенности проведения и назначается, исходя из состояния пациента. Для выбора наилучшего способа необходимо проконсультироваться с врачом.
Качественный способ
Этот метод применяется для того, чтобы подтвердить или опровергнуть факт присутствия вируса в организме. Его основной недостаток – невозможность установить штамм ВПЧ (только 14-21 виды). Чаще всего качественный способ используется вместе с другими методами выявления папилломавируса. Результат при этом передается с помощью 2 оценок: «обнаружено» или «не обнаружено». То есть метод либо констатирует факт наличия чужой ДНК, либо показывает ее отсутствие.
Генотипирование
Методика способна определить как просто наличие вируса в организме, так и установить его вид. Этот способ применяют, когда необходимо установить, осталась ли вирусная ДНК после лечения или случился рецидив вследствие нового заражения. Генотипирование позволяет оценить эффективность проведенного лечения посредством определения вида вируса. Если этот тот же штамм, от которого лечился больной, значит, терапия прошла безуспешно. Если же исследование показывает другой вид ВПЧ, можно говорить о повторном заражении. Результат также представлен формулировками «обнаружено» или «не обнаружено».
Комбинированный метод
Узкоспециализированный способ диагностики, основанный на соединении качественного метода и определения 16 штамма посредством генотипирования. Результат представлен 3 ответами: «не обнаружено», «обнаружен 16 штамм», «обнаружен ВПЧ с 16 типом включительно». Этот метод применяется при подозрении на наличие высокоонкогенного типа папилломавируса, способного вызывать у женщин рак шейки матки.
Количественный метод
Такой способ позволяет установить концентрацию вируса в организме и отследить развитие ВПЧ. Считается наиболее информативным, так как позволяет определить тяжесть протекающего процесса, исходя из которой, подбирается лечение. Основан на определении количества вирусных клеток в рамках исследуемых 100 тысяч. Когда их совокупность превышает 5, это свидетельствует о высокой концентрации папилломавируса, что повышает возможность появления раковых клеток. Если количество клеток меньше 3, концентрация указывается как незначительная.
Как сдавать анализ
Специальной подготовки для проведения диагностики не требуется. Главное условие – не мочиться за несколько часов до процедуры. Желательно не вступать в половые контакты за 2-3 дня до обследования, а также не принимать алкоголь. При этом нельзя забывать о проведении процедур для поддержания интимной гигиены.
Как сдают анализ мужчины
Головка полового органа вместе с мочеиспускательным каналом обрабатывается физ. раствором. Врач использует специальную щеточку, вставляемую примерно на 4 сантиметра. С помощью легкого вращения собирается материал для исследования с уретры. Полученный анализ оставляется в пробирке и отправляется на дальнейшее исследование в лабораторию. Биоматериал при этом может храниться не более 2 суток с момента получения.
Как сдают анализ женщины
Перед взятием анализа на шейку матки наносят стерильный раствор. Затем с помощью щеточки берется мазок из цервикального канала. Приспособление оказывается на глубине около сантиметра, потом врач делает соскоб со стенок вращательными движениями. Биоматериал помещается в пробирку, где находится примерно 15 секунд. Там врач обтирает его об стенки, а затем вынимает. После этого содержимое пробирки отправляется на диагностику.
Забор биоматериала
Правильный забор материала – залог успешного проведения диагностики. Если при этом процессе нарушается стерильность, и в пробирку попадают чужеродные микроорганизмы, может произойти обнаружение «вируса», которого в действительности нет. Кроме того, ошибка может произойти из-за небольшого количества клеток, взятых на анализ.
Расшифровка анализа ПЦР
В зависимости от способа диагностики пациент увидит различные контрольные результаты. Графа «не обнаружено» свидетельствует о том, что вирус не присутствует в организме, либо его количество настолько незначительно, что не поддается обнаружению. Результат «обнаружено», соответственно, говорит о наличии патологического процесса.
Если пациент использовал количественный метод, расшифровка будет следующей:
- Lg 5 и выше – показатель большой концентрации вируса;
- Lg 3−5 – уровень вируса значительный, но не критический;
- Lg меньше 3 – малозначимое количество вирусных клеток.
В любом случае точной расшифровкой должен заниматься врач, ведь на основании этого ставится диагноз. Кроме того, через какое-то время желательно повторить процедуру, чтобы исключить ложноотрицательный или ложноположительный результат.
Источник
Вирусов папилломы человека существует более ста различных видов.
На основании способности к активации опухолевых изменений в клетках организма все известные папилломавирусы можно разделить на три основных типа: неонкогенные, высокого онкогенного риска и низкого онкогенного риска. Важно понимать, что человек одновременно может заразиться несколькими типами вируса.
Неонкогенные папилломавирусы никогда не станут причиной злокачественного заболевания.
Вирусы низкого онкогенного риска вызывают появление вирусных бородавок на коже, а также аналогичных образований на слизистых – остроконечные кондиломы. Эти образования часто называют папилломы, но в медицинской терминологии это не принято. При определенных условиях они могут привести к озлокачествлению вызванного ими процесса, но это происходит сравнительно редко.
Вирусы высокого онкогенного риска более опасны, под влиянием различных факторов они могут спровоцировать появление злокачественной опухоли. Именно они являются причиной предраковых заболеваний и рака шейки матки — наиболее часто встречаемой злокачественной опухоли женской половой системы в репродуктивном периоде.
Попав в организм, вирус папилломы человека проникает в эпителий. Длительное присутствие вируса в клетках шейки матки вызывает изменения, приводящие к появлению раковых клеток. Ежегодно персистирующая инфекция вызывает более чем 500 000 случаев заболевания раком шейки матки. При этом практически половина женщин умирает в течение первого года в связи с поздним диагностированием III — IV стадий заболевания.
Факторы риска ВПЧ
Как передается вирус папилломы? Основным путём заражения является половой. Использование барьерной контрацепции (презервативы) снижает риск передачи, но не на 100%. Также существует контактный механизм передачи — через повреждения на коже, при контакте с зараженной поверхностью пораженные клетки могут проникать в организм человека.
Симптомы и первые признаки заболевания
Даже попав в организм человека, вирусы папилломы человека вначале могут никак себя не проявлять. При снижении иммунитета вирус активируется и начинает размножаться. На этой стадии возникают клинические проявления.
При заражении ВПЧ низкого онкогенного риска пациентов наиболее часто пациентов беспокоит визуальный дискомфорт, связанный с появлением бородавок на любом участке кожи и слизистых оболочек. Данные образования в аногенитальной области носят особое название – остроконечные кондиломы или аногенитальные бородавки. Они нередко сопровождаются кожным зудом. Как правило, это образования различных оттенков коричневого цвета, имеющие неровную поверхность, могут быть на узком основании (ножке).
Внешний вид кожных бородавок
Отличительной особенностью бородавок и кондилом является быстрый и мультицентрический рост. Наличие единичных бородавок на коже и слизистых является косвенным признаком ВПЧ инфекции и требует диагностики.
Большинство инфекций, которые вызваны высокоонкогенными типами ВПЧ, протекают бессимптомно. Возможно лишь общее снижение иммунитета. Зачастую вирус можно определить только после забора мазков. Однако длительное присутствие онкогенного типа вируса приводит к развитию предраковых патологий, которые без соответствующей терапии перерождаются в злокачественный процесс. Хорошо известно, что на ранних стадиях заболевания рак шейки матки практически бессимптомен, а специфические проявления (выделения и нерегулярные кровотечения, боли в спине, в области таза, в ногах; односторонняя отечность ног) возникают уже при большом распространении процесса.
Вирусы высокого онкогенного риска — HPV 16, 18, 31, 33, 39, 50, 59, 64, 68, 70. Наиболее изученные и агрессивные — 16 и 18 типов, эти ВПЧ у женщин являются причиной до 70% всех случаев предраковых состояний и рака шейки матки.
Диагностика ВПЧ у женщин
Выявить отдельный тип вируса папилломы достоверно позволяет метод полимеразной цепной реакции, так называемый ПЦР. Для анализа достаточно мазка из влагалища в пробирку со специальной средой. ПЦР — это простой, но высокочувствительный способ.
Положительный тест на ВПЧ 16 и 18 ассоциируется с более высоким риском злокачественного заболевания.
Пробирка типа Eppendorf для сбора материала для анализа на ВПЧ
Важно понимать, что изменения на шейке матки часто не видны невооруженным глазом, поэтому необходимо использовать специальные методы дообследования, такие как кольпоскопия и мазки с шейки матки и цервикального канала.
Кольпоскопия – осмотр слизистой шейки матки с помощью специального прибора — кольпоскопа.
При этом проводятся 2 пробы:
- Acetic Acid Test — тест с раствором уксусной кислоты
- проба Шиллера — обработка поверхности шейки матки йодным раствором Люголя.
На основании полученных данных судят об удовлетоворительной или неудовлетворительной кольпоскопической картине. Это исследование проводят с использованием специальной окраски по методу Папаниколау, поэтому оно часто встречается под термином PAP test.
Выявление патологического типа мазка и неудовлетворительная кольпоскопическая картина являются показаниями для биопсии подозрительных очагов.
Окраска мазка по методу Папаниколау
Профилактика и лечение
На настоящий момент активно обсуждается вопрос профилактики вируса папилломы человека.
Пациенты часто спрашивают, существует ли вакцина от рака шейки матки?
На самом деле такой вакцины не существует. Не существует лечения вируса папилломы, которое бы позволило полностью убрать вирус из организма человека. Лечению подлежит только результат воздействия вируса на клетки организма. Используются схемы, содержащие противовирусные препараты и иммуномодуляторы. Сами папилломы можно удалять хирургическим путем: радиоволновой методикой, лазерокоагуляцией, а также методами химической деструкции.
Все данные виды терапии активно применяются на базе Национального медицинского исследовательского центра онкологии имени Н.Н. Петрова после тщательного осмотра, обследования и индивидуального подбора лечения высококвалифицированными специалистами. Прохождение терапии в условиях неспециализированного учреждения может повлечь распространение вируса на окружающие ткани, повреждённые в процессе удаления поражённых участков.
Вакцины против вируса папилломы человека
На сегодняшний день используются 2 вакцины, рекомендованные к применению. Оптимальным считается проведение вакцинации девочек до начала половой жизни.
С 2006г применяется вакцина Gardasil (рис.4). Это квадривалентная вакцина, т.е. она направлена против ВПЧ 6, 11, 16 и 18 типов.
Рекомендуемый курс вакцинации состоит из 3 доз и проводится по схеме: первая доза — в назначенный день; вторая — через 2 мес после первой; третья — через 6 мес после первой. Проведение полного курса приводит у 99% вакцинированных к образованию стойкого иммунитета на период не менее 36 мес во всех возрастных группах. Вакцинации подлежат дети и подростки, а также молодые женщины в возрасте от 9 до до 26 лет.
Другая вакцина — Церварикс. Создана в 2007году для профилактики заболеваний, вызванных вирусами папилломы человека 16 и 18 типов. Полный курс вакцинации по схеме 0–1–6 мес приводит к образованию специфического иммунитета у 100% вакцинированных через 18 мес после введения последней дозы вакцины в возрастных группах от 10 до 25 лет. Необходимость ревакцинации к настоящему времени не установлена.
Вакцины против вируса папилломы человека а) Гардасил б) Церварикс
В ряде регионов РФ пациенток прививают бесплатно, в других же вакцинация осуществляется на коммерческой основе.
Динамическое наблюдение
На сегодняшний день скрининг рака шейки матки на территории РФ регламентирован Приказом № 572н Министерства здравоохранения: профилактические осмотры c проведением цитологического скрининга проводятся не реже 1 раза в год. Контроль ПЦР отделяемого из влагалища на наличие вируса папилломы человека в рамках профилактического медицинского осмотра не прописан. Однако, согласно мировым стандартам, определение ВПЧ является важным и неотъемлемым фактором прогноза заболеваний шейки матки. Первичное тестирование ВПЧ рекомендовано, как и рекомендован цитологический скрининг эпителия шейки матки. Интервал скрининга для пациентов с нормальными результата цитологического теста и отрицательным тестом на ВПЧ варьирует от 1 до 3х лет.
Источник