Пцр на впч квант

Папилломавирус считается одним из наиболее распространенных заболеваний, передающихся половым путём. Он способен локализоваться в области кожных покровов и на слизистых оболочках, что делает его особенно опасным с точки зрения возникновения онкологических процессов. Выявление вируса папилломы человека происходит при помощи разных способов, среди которых особенно выделяется ПЦР диагностика. Одним из разновидностей этого метода считается анализ Квант 21.

Что это такое?

Квант 21 представляет собой количественное исследование, проводящееся в рамках ПЦР диагностики. Анализ позволяет за короткое время определить наличие вируса в организме, а также с высокой точностью показать разновидность ВПЧ и степень поражения. Такой метод эффективен как в начале лечения, так и в конце. В первом случае он необходим, чтобы определить уровень запущенности заболевания, во втором – помогает оценить эффект от проведенного комплекса лечебных мероприятий.

ПЦР диагностика в реальном времени

В рамках анализа организм пациента изучают на наличие 21 штамма папилломавируса разной степени онкогенности. Так, условно можно выделить две большие группы изучаемых разновидностей ВПЧ:

1. Низкий уровень онкогенности: 6, 11, 44 штаммы. Их риск перерождения в злокачественные опухоли минимален, однако такие виды вируса могут проявляться папилломатозом гортани или бородавками.
2. Высокий и средний уровень онкогенности: включает в себя штаммы ВПЧ с 16 по 82. Эти виды вируса не всегда проявляются внешне в виде папиллом или кондилом, поэтому несут в себе большую опасность. Обнаружить их без специальных анализов невозможно, зато последствием заражения может стать неоплазия шейки матки, бовеноидный папулез или онкологические процессы.

Квант 21 подходит как для исследования пациентов с явными признаками вируса, так и для тех, кто не наблюдает внешних изменений.

Преимущества метода

Эта разновидность анализа успешно используется в медицине, так как способна справиться сразу с несколькими задачами одновременно:

• определить концентрацию вируса в организме и степень его влияния на состояние иммунитета;
• наблюдать за динамикой болезни пациента, улавливая малейшие изменения;
• оценивать заболевание в настоящий момент и делать прогнозы относительно его дальнейшего развития;
• подбирать индивидуальное лечение на основании полученных результатов диагностики.

Кроме того, Квант 21 обладает высокой чувствительностью к вирусным элементам и легко распознает их присутствие в организме. При этом расшифровка диагностики оказывается у пациента очень быстро благодаря высокой скорости обработки результатов.

Подготовка к анализу

Для проведения процедуры пациенту необходимо соблюдать те же требования, что и для других ПЦР анализов. Перед осуществлением диагностики пациенту необходимо придерживаться ряда специальных указаний:

• воздержаться от половых контактов за 2 суток до забора биоматериала;
• за несколько недель отказаться от использования антибиотиков;
• не применять средства для интимной гигиены, содержащие в составе бактерицидные компоненты;
• воздержаться от похода в туалет за 2-3 часа до проведения диагностики.

Временные ограничения для женщин возникают в период менструации или при вагинальных кровотечениях. Обострение хронических или инфекционных заболеваний также считается противопоказанием для проведения анализа.

Если пациент хочет проверить наличие вируса в организме после незащищённого полового контакта, следует выдержать период не менее 3 недель. За это время ВПЧ, если он попал в организм и не был остановлен иммунной системой, проявит себя и уже будет заметен в анализах.

Как делается анализ?

Основным исследовательским материалом для выявления вируса выступают эпителиальные клетки. Их врач может взять из уретры, шейки матки или влагалища.

Зонд для взятия биоматериала

Проведение процедуры может немного отличаться, исходя из места забора биологического материала:

1. Уретра. Участок в месте проведения процедуры должен быть обработан и стерилен. Поэтому место анализа всегда обрабатывают с помощью дезинфицирующего тампона из ваты. При отсутствии различных выделений врач извлекает из уретры материал для анализа при помощи специального зонда. У женщин зонд может погружаться на глубину не более 5 см. Для тех девушек, кто еще не живет половой жизнью, процедура выполняется на поверхности уретры.
2. Цервикальный канал. Для начала необходимо убрать образовавшуюся слизь в области шейки матки, чтобы она не мешала проведению процедуры. Затем врач обрабатывает необходимую зону физиологическим раствором и вводит зонд на 2-3 см. После сбора материала инструмент вынимается очень аккуратно. Важно, чтобы он не дотрагивался до стенок влагалища.
3. Влагалище. Для забора биологического материала применяется мануальный метод. Предварительно место врачебных манипуляций так же обрабатывается ватным тампоном для удаления слизи. Затем во влагалище погружается кисточка, собирающая эпителиальные клетки.

Важно отметить, что если при проведении процедуры наблюдаются выделения, смешанные с гноем, забор материала лучше проводить через 20 минут после того, как пациент облегчит мочевой пузырь. Это единственное исключение, разрешающее мочеиспускание перед анализом.

Расшифровка результатов

Выделение ДНК

Тест будет показывать положительный результат при наличии вирусной ДНК в организме пациента. Однако даже ее отсутствие не всегда гарантирует, что человек полностью здоров.

Причинами отрицательного результата также может быть очень низкое содержание вирусной концентрации, которое не фиксируется в лабораторных условиях. Это может показывать либо начальную стадию заболевания, когда папилломавирус еще не активизировался, либо состояние организма после лечения.

Результаты исследования при этом расшифровываются следующим образом:

• < 3 Lg – концентрация вируса отсутствует совсем или крайне незначительна;
• 3 Lg-5 Lg – средний уровень вирусной нагрузки, не исключен риск возникновения дисплазии шейки матки;
• 5 Lg – высокая концентрация вируса, показатель быстро прогрессирующего заболевания.

При диагностике также не исключен риск получения ложноположительных результатов, однако частота таких случаев очень мала. Это может произойти вследствие некомпетентного забора или хранения биоматериала пациента, а также из-за несоблюдения правил подготовки к сдаче анализов.

Где можно сделать?

ПЦР диагностикой по методу Квант 21 занимаются многие исследовательские лаборатории. В их числе, например, можно выделить Инвитро или Юнилаб, имеющие свои центры по всей стране. Стоимость такой процедуры варьируется от 2000 до 2500 рублей.

Дополнительные анализы

Помимо анализа Квант 21 врачи рекомендуют использовать и другие методы выявления вируса. Комплексная диагностика поможет в точной постановке диагноза и исключит наличие смежных заболеваний. В числе наиболее распространенных методов обследования:

1. Цитология. Предполагает исследование соскоба, взятого из области шейки матки. Метод помогает увидеть изменение клеточных структур, возникающее из-за действия вируса.
2. Биопсия. Обычно проводится во время гинекологического осмотра или после кольпоскопии. Это обследование направлено на изучение под микроскопом тканей, взятых с помощью соскоба. Биопсия способна подтвердить или опровергнуть наличие изменений в тканях и, соответственно, наличие ВПЧ.
3. Гистология. Один из наиболее точных методов определения патологий. В процессе исследования анализируется материал, полученный при помощи биопсии.
4. Digene — тест. Специфический тест, обладающий высокой чувствительностью к вирусным частицам. Позволяет отследить не только наличие вируса, но и с точностью диагностировать штамм заболевания.

При диагностике папилломавируса всегда необходимо проводить комплексную диагностику, чтобы не ошибиться с постановкой диагноза. Своевременное обследование поможет назначить правильное лечение и предотвратить развитие онкологических процессов.

Количественное определение ДНК ВПЧ 21 типа (6, 11, 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 44, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82) в соскобе эпителиальных клеток урогенитального тракта методом ПЦР с детекцией в режиме «реального времени».

Вирус папилломы человека (ВПЧ, Human papillomavirus, HPV) относится к малым ДНК-содержащим вирусам, которые инфицируют эпителиальные клетки и индуцируют пролиферативные поражения кожи и слизистых оболочек. В настоящее время известно около ста типов ВПЧ с различным онкогенным потенциалом, которые условно объединяют в группы высокого и низкого онкогенного риска. Более 90% всех цервикальных карцином позитивны к присутствию ВПЧ. Наиболее часто в биоматериале из опухолей шейки матки обнаруживают 16-й и 18-й типы. Выявление ДНК ВПЧ не подтверждает наличие злокачественного процесса, в большинстве (до 90%) случаев в течение 12-36 месяцев происходит элиминация вируса и самоизлечение. При длительной хронической персистенции вируса и в зависимости от его типа повышается риск развития онкологического процесса. Диагностика заболевания требует дополнительного цитологического, гистологического исследования и динамического наблюдения.

Инфицирование ВПЧ 6, 11, 44 типов может привести к развитию остроконечных кондилом (аногенитальных бородавок). Возбудитель передается при половых контактах, а также может переходить от матери к плоду, вызывая папилломатоз гортани у ребенка. Инкубационный период составляет от нескольких недель до нескольких месяцев. Характер разрастаний и объем пораженных участков варьирует от практически незаметных до обширных. Возможна злокачественная трансформация инфицированных клеток.

Количественное определение ДНК ВПЧ позволяет врачу-клиницисту подобрать оптимальную схему лечения для каждого пациента и при необходимости контролировать эффективность терапии.

Поскольку ВПЧ инфицирует эпителиальные клетки, необходимым условием получения достоверного результата является соблюдение техники взятия соскоба. В состав тестов по диагностике и мониторингу ВПЧ введен специальный параметр – контроль взятия материала (КВМ). КВМ – это тест по определению количества геномной ДНК человека в биоматериале, источником которой служат эпителиальные клетки, попавшие в пробу.

Аналитические показатели: 

Литература

1. Профилактика рака шейки матки: Руководство для врачей. – М.: Изд. «МЕДпресс-информ». 2008:41.  
2.  Заболевания шейки матки и генитальные инфекции. Под ред. проф. В.Н. Прилепской. – М.: Изд. «ГЭОТАР-Медиа». 2016:384. 
3. Папилломавирусная инфекция. Пособие для врачей. Под ред. проф. д.б.н. В.М. Говоруна. 2009:55. 
4. Bekkers R., Meijer C., et al. Effects of HPV detection in population-based screening programmers for cervical cancer: a Dutch moment. Gynecologic oncology. 2006;100(3):451-454. 
5. Khan M. et al. The elevated 10-year risk of cervical precancer and cancer in women with human papillomavirus (HPV) type 16 or 18 and the possible utility of type specific HPV testing in clinical practice. Journal of the National Cancer Institute. 2005; 97:1072-1079.  
6. Snijders J., Meijer C. The value of viral load in HPV detection in screening. HPV today. 2006;8:8-9.

Вирус папилломы человека (ВПЧ) – распространенное заболевание, протекание которого носит хронический характер и чревато рецидивами. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – один из самых современных способов диагностики папилломавируса. Этот способ считается надежным и позволяет выявить не только наличие вируса в организме, но также его тип и количество. ПЦР чувствителен даже к неактивной форме вируса, при которой отсутствуют внешние проявления в виде папиллом и кондилом.

Общие сведения

Анализ строится на исследовании ДНК пациента с целью обнаружения в ней присутствия чужеродных элементов. Любая ДНК строится на основе четырех нуклеотидов, располагающихся в определенной последовательности. Когда в организм попадает вирус, происходит изменение порядка в этой цепи, что позволяет оперативно отследить деятельность даже незначительных инородных частиц. Метод ПЦР диагностики проводится с использованием вирусных частиц, что обусловливает быстрое деление клеток.

Такая диагностика способна отследить активность ВПЧ не только в момент его протекания в скрытой фазе, но и в инкубационный период, когда папилломавирус еще не успел заявить о себе. ПЦР позволяет выявить:  

• наличие ВПЧ;
• штаммы, которыми инфицирован больной;
• количественное содержание вируса в организме.

Большинство людей инфицированы папилломавирусом, однако сильный иммунитет подавляет его проявления и не дает размножаться. Поэтому обнаружение ВПЧ качественным методом может быть не всегда оправдано. Это не рационально в случае, если вирус присутствует в организме, но его воздействие минимально и никак не вредит человеку. Тем не менее качественный анализ покажет положительный результат, чем может вести пациента в замешательство.

Поэтому для диагностики чаще всего применяют количественный метод, позволяющий отследить количество вируса в организме и определить, насколько опасна его деятельность. Кроме того, важно установить штамм ВПЧ. Они делятся по степени онкогенности: одни совершенно безопасны и способны вызывать только косметические проблемы, другие могут стать причиной возникновения рака.

Каждая ситуация требует индивидуального подхода, поэтому прежде чем сдавать анализ, желательно проконсультироваться с врачом. Он подскажет, каким методом и на какие штаммы лучше всего проверяться, исходя из состояния пациента.

Показания для анализа

Инфицирование ВПЧ возможно только при непосредственном контакте с зараженным человеком. Вирус попадает в кровь и начинает размножение в области верхних слоев кожи, что обусловливает появление его характерных признаков – возникновение папиллом и кондилом.  ВПЧ распространяется следующими путями:

• при незащищенных половых контактах;
• при естественных родах от инфицированной матери к ребенку;
• контактно-бытовым путем через предметы общего пользования, личные вещи, одежду и т.д.;
• во время тесного контакта с кожей больного.

Чаще всего диагностировать ВПЧ приходят люди, у которых видны внешние признаки болезни. Однако если они никак не проявляются, это не является гарантией отсутствия вируса. Он также может присутствовать в крови и развиваться бессимптомно. Это особенно характерно для высокоонкогенных типов вируса: 16 и 18 штамма, которые провоцируют возникновение рака. Направление на диагностику этих типов обычно происходит при обращении к профильным специалистам: гинекологу и урологу.  

Преимущества метода

ПЦР считается одним из главных методов диагностики и остается самым востребованным среди врачей. Он используется не только для выявления ВПЧ, но также помогает обнаруживать другие заболевания, передающиеся половым путем, гепатиты, скрытые инфекции и т.д. ПЦР диагностика обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами выявления заболеваний. Среди них:

1. Высокая специфичность. Тест помогает с большой вероятностью отделить следы чужеродной ДНК от ДНК человека в рамках собранного материала.
2. Высокая производительность. ПЦР представляет собой автоматизированный процесс, помогающий провести диагностику непосредственно в день сдачи анализа. Такая скорость исследования позволяет пациенту не волноваться о результате на протяжении долгого времени и получить результат уже через несколько дней.
3. Возможность сделать сразу несколько анализов. На основании одного собранного образца можно провести диагностику для выявления нескольких заболеваний. Например, одновременно можно выявить возбудителя хламидиоза и гонореи. При этом такая процедура не сможет отрицательно повлиять на достоверность результата.
4. Высокая чувствительность. Тест позволяет обнаружить деятельность вируса даже в инкубационный период, когда его концентрация очень мало. Это поможет предупредить развитие патологического процесса и начать своевременное лечение.

Недостатки метода

Существуют, однако, и некоторые отрицательные моменты в проведении ПЦР диагностики. Главный из них – возможность получения ложноположительного результата. Это происходит в случае, если лечение уже проведено, инфекция побеждена, но мертвые клетки еще остаются внутри тканей. Для обновления клеток необходимо время.

Если провести анализ раньше 2-3 месяцев, ПЦР может показать положительный результат, в действительности принимая уже мертвые клетки за живые. Метод не делает различий между ними, он нацелен на поиск ДНК вируса, которую может найти даже в уже отмерших клетках. Все это приводит к получению ложноположительного результата. Избежать такой ситуации можно, если сдавать анализ в установленный лечащим врачом срок.

Также существует риск ложноотрицательного результата. В этом случае пациент никак не может повлиять на качество диагностики, так как ложноотрицательный анализ – просчет лаборатории. Он может возникнуть если:

• собранный материал неправильно транспортировался и хранился;
• нарушается стерильность, и в полученные пробы попадают другие микроорганизмы;
• реагенты были непригодными.

Для того чтобы исключить возможность получения ложноотрицательного результата, необходимо выбирать проверенную лабораторию с квалифицированным персоналом.

Виды методик

В рамках проведения ПЦР диагностики разработаны четыре метода тестирования. Каждый из них имеет свои особенности проведения и назначается, исходя из состояния пациента. Для выбора наилучшего способа необходимо проконсультироваться с врачом.

Качественный способ

Этот метод применяется для того, чтобы подтвердить или опровергнуть факт присутствия вируса в организме. Его основной недостаток – невозможность установить штамм ВПЧ (только 14-21 виды). Чаще всего качественный способ используется вместе с другими методами выявления папилломавируса. Результат при этом передается с помощью 2 оценок: «обнаружено» или «не обнаружено». То есть метод либо констатирует факт наличия чужой ДНК, либо показывает ее отсутствие. 

Генотипирование

Методика способна определить как просто наличие вируса в организме, так и установить его вид. Этот способ применяют, когда необходимо установить, осталась ли вирусная ДНК после лечения или случился рецидив вследствие нового заражения. Генотипирование позволяет оценить эффективность проведенного лечения посредством определения вида вируса. Если этот тот же штамм, от которого лечился больной, значит, терапия прошла безуспешно. Если же исследование показывает другой вид ВПЧ, можно говорить о повторном заражении. Результат также представлен формулировками «обнаружено» или «не обнаружено».

Комбинированный метод

Узкоспециализированный способ диагностики, основанный на соединении качественного метода и определения 16 штамма посредством генотипирования. Результат представлен 3 ответами: «не обнаружено», «обнаружен 16 штамм», «обнаружен ВПЧ с 16 типом включительно». Этот метод применяется при подозрении на наличие высокоонкогенного типа папилломавируса, способного вызывать у женщин рак шейки матки.

Количественный метод

Такой способ позволяет установить концентрацию вируса в организме и отследить развитие ВПЧ. Считается наиболее информативным, так как позволяет определить тяжесть протекающего процесса, исходя из которой, подбирается лечение. Основан на определении количества вирусных клеток в рамках исследуемых 100 тысяч. Когда их совокупность превышает 5, это свидетельствует о высокой концентрации папилломавируса, что повышает возможность появления раковых клеток. Если количество клеток меньше 3, концентрация указывается как незначительная.   

Как сдавать анализ

Специальной подготовки для проведения диагностики не требуется. Главное условие – не мочиться за несколько часов до процедуры. Желательно не вступать в половые контакты за 2-3 дня до обследования, а также не принимать алкоголь. При этом нельзя забывать о проведении процедур для поддержания интимной гигиены.

Как сдают анализ мужчины

Головка полового органа вместе с мочеиспускательным каналом обрабатывается физ. раствором. Врач использует специальную щеточку, вставляемую примерно на 4 сантиметра. С помощью легкого вращения собирается материал для исследования с уретры. Полученный анализ оставляется в пробирке и отправляется на дальнейшее исследование в лабораторию. Биоматериал при этом может храниться не более 2 суток с момента получения. 

Как сдают анализ женщины

Перед взятием анализа на шейку матки наносят стерильный раствор. Затем с помощью щеточки берется мазок из цервикального канала. Приспособление оказывается на глубине около сантиметра, потом врач делает соскоб со стенок вращательными движениями. Биоматериал помещается в пробирку, где находится примерно 15 секунд. Там врач обтирает его об стенки, а затем вынимает. После этого содержимое пробирки отправляется на диагностику. 

Забор биоматериала

Правильный забор материала – залог успешного проведения диагностики. Если при этом процессе нарушается стерильность, и в пробирку попадают чужеродные микроорганизмы, может произойти обнаружение «вируса», которого в действительности нет. Кроме того, ошибка может произойти из-за небольшого количества клеток, взятых на анализ.

Расшифровка анализа ПЦР

В зависимости от способа диагностики пациент увидит различные контрольные результаты. Графа «не обнаружено» свидетельствует о том, что вирус не присутствует в организме, либо его количество настолько незначительно, что не поддается обнаружению. Результат «обнаружено», соответственно, говорит о наличии патологического процесса.

Если пациент использовал количественный метод, расшифровка будет следующей:

• Lg 5 и выше – показатель большой концентрации вируса;
• Lg 3−5 – уровень вируса значительный, но не критический;
• Lg меньше 3 – малозначимое количество вирусных клеток.

В любом случае точной расшифровкой должен заниматься врач, ведь на основании этого ставится диагноз. Кроме того, через какое-то время желательно повторить процедуру, чтобы исключить ложноотрицательный или ложноположительный результат.