Метод пцр впч вкр 39
Диагностирование ВПЧ осложняется вялым развитием процессов в молодом организме, которые часто не дают специфической симптоматики. Для выявления болезни на ранней стадии и профилактического контроля заболеваемости используют централизованный скрининг на ВПЧ ВКР.
Что такое скрининг ВПЧ ВКР
Скрининг – это целенаправленное обследование определенных групп населения с целью выявить заболевание. Скрининг проводится по специально разработанной методике подготовленным персоналом.
ВПЧ представляет собой заразные штаммы ДНК содержащего папилломавируса.
Все папилломавирусы (а их насчитывается больше сотни) делят на:
- высокоонкогенные штаммы – вирусы, которые способны вызвать дисплазию тканей кожи или слизистых человека, с последующим их злокачественным перерождением;
- низкоонкогенные – группа вирусов, деятельность которых вызывает доброкачественные образования (папилломы, бородавки).
Обратите внимание! Аббревиатура ВКР означает высокий канцерогенный риск. ВПЧ ВКР – так обозначают штаммы вируса, которые вызывают рак. У женщин это рак шейки матки, у мужчин – рак полового члена. Для Европейских жителей и населения России это 18, 16, 31 и 45 генотипы папилломавируса.
При активизации ВПЧ типа ВКР происходит изменение и перерождение тканей, которое оканчивается злокачественным процессом.
Скрининг на папилломавирусы высокой степени онкогенности проводят пошагово, по специально разработанной схеме:
- Проведение анализа цервикального мазка на предмет наличия или отсутствия измененных клеток (дисплазии) в организме пациента (ПАП тест).
- При положительной реакции на ПАП-тест проводят количественное определение вируса, его идентификацию (расширенный скрининг).
Фото 1: Скрининг на ВПЧ ВКР показан всем женщинам, начиная с 24 летнего возраста. Проводится должен при прохождении плановой диспансеризации населения, при профессиональных медосмотрах, по личному обращению пациентки. Источник: flickr (Eugene Evehealth).
Рекомендуемая периодичность мероприятия 1 раз в 3 года.
Обратите внимание! Скрининг позволяет снизить заболеваемость раком половых органов в сотни раз, что имеет важное значение при растущей тенденции заражения.
Показания для сдачи анализов
Показанием для сдачи анализов является:
- появление кондилом (иных новообразований) на половых органах, в анальной зоне или ротовой полости;
- выделения из половых органов неясной этиологии;
- личное беспокойство человека по поводу возможного заражения после незащищенного контакта;
- профилактический контроль.
Важность обследования
Важно! Выявление дисплазии тканей слизистых половых органов на ранней стадии имеет решающее значение при прогнозе эффективности терапии. Раннее выявление ВПЧ ВКР в организме позволяет принять превентивные терапевтические меры для его уничтожения.
От инфицирования до развития рака проходит от 5 до 15 лет. Выявление латентной формы присутствия вируса в организме дает:
- возможность динамического контроля состояния половых органов и деятельности вируса (вирусоносителям повторяют обследование ежегодно);
- возможность раннего лечения, когда прогноз наиболее благоприятен.
Статистика показывает, что рак шейки матки занимает 3 место среди онкологии половых органов женщины. Исследования причин развития онкопатологии матки подтверждают прямую связь между инфицированием ВПЧ ВКР и последующим развитием рака.
Фото 2: Каждая 8 из 10 женщин, перешагнувших 50-летний рубеж, заражена или переболела ВПЧ. Эта цифра увеличивается год от года в связи с все большей сексуальной активностью населения. Источник: flickr (Eugene Evehealth).
Виды скрининга на ВПЧ ВКР
Наиболее информативной и недорогой является методика скрининга, которая используется в России – исследование на цитологию позволяет на первом этапе «отсеять» здоровых обследуемых, дальнейшее исследование проводить только пациентам с выявленной дисплазией тканей.
Анализ на цитологию (ПАП-тест)
ПАП-тест это анализ по методике Папаниколау.
Этот вид тестирования отличает высокая точность анализа.
Для проведения анализа делается забор материала из цервикального канала шейки матки у женщин или уретры у мужчин. Процедура безболезненная, проводится в условиях обычного осмотра.
Материал помещается либо на стекло (уходящая практика), либо в специальную жидкостную среду, что удобнее для проведения исследования.
Жидкостный ПАП-тест берется специальной щеточкой, которая помещается в подготовленную жидкую среду для транспортировки и хранения. Такая методика забора и хранения биоматериала позволяет сохранить и проанализировать все клетки взятого эпителия.
Как подготовиться к процедуре
Для того, чтобы ПАП-тест был максимально достоверным следует соблюдать несколько условий:
- за 2 дня до посещения врача отказаться от половых контактов, спринцеваний, введения вагинальных медицинских средств;
- женщинам визит следует планировать в первой половине менструального цикла, но после полного окончания месячного кровотечения;
- исследование не проводят в период обострения хронических инфекций или остропротекающих заболеваний;
- исследование не проводят непосредственно после курса антибактериальной или противовоспалительной медикаментозной терапии.
Расширенный скрининг
Обратите внимание! Расширенный скрининг представляет собой контролируемый забор биоматериала для проведения анализа в режиме реального времени на определение не только наличия или отсутствия ВПЧ, но и типа, количества папиллома вируса человека онкогенной группы.
Анализ проводится методом ПЦР качественного направления на основе RT-PCR.
Данная методика позволяет интерпретировать результаты анализов для расшифровки по Дайджин-тесту. И корректировать дальнейшую тактику работы с пациентом.
Забор биоматериала не отличается от обычного взятия мазка. Требования по подготовке к расширенному тестированию такие же как и к ПАП-тесту:
- Воздержание от применения лекарственных средств влагалищных за 2 суток до;
- Воздержание на этот же период от половых контактов;
- Отсутствие менструального кровотечения.
ПЦР анализ
Анализ выявления ВПЧ с использованием полимерно-цепной реакции (ПЦР-тест) на его ДНК обладает высокой степенью достоверности. С его помощью можно определить:
- факт инфицирования;
- генотип папилломавируса;
- степень распространения (количественный анализ).
Анализ возможен на любой жидкости из организма пациента: кровь, слизистое отделяемое, моча.
Подготовка
- Женщинам не следует сдавать биоматериал из влагалища во время менструации;
- Мужчинам запрещено мочиться за 1,5 часа до процедуры;
- Кровь сдают на голодный желудок;
- При заборе материала из половых органов женщинам запрещено спринцеваться накануне вечером;
- Исключаются любые медикаменты за 2 дня до проведения забора биоматериала.
Результаты анализов
- Тест по Папаниколау (ПАП-тест) может быть отрицательным (измененные клетки не обнаружены) или положительным (во взятом образце обнаружены онкоклетки);
- ПЦР-тест показывает наличие или отсутствие ВПЧ;
- Расширенный скрининг определяет тип вируса и его количество.
Количественный результат по Дайджин-тесту интерпретируется:
- менее 3 Lg – концентрация вируса незначительная;
- от 3 Lg до 5 Lg – средняя степень присутствия;
- более 5 Lg – высокая концентрация ВПЧ.
Источник
Как известно, ВПЧ инфицированы большинство половозрелых сексуально активных людей (более 70%). Клиническая картина болезни характеризуется поражением эпителиальной ткани – кожи, слизистых оболочек. До появления клинических признаков – папиллом/папилломатоза, кондилом, бородавок, обнаружить присутствие в организме вируса стандартными методами диагностики невозможно – он долгое время может никак не проявлять себя. Но ПЦР на ВПЧ как тест используется не только для подтверждения присутствия вируса, но и для установления его принадлежности к определенному типу (их найдено более 100). Это важно для определения вероятности озлокачествления папиллом и кондилом, так как вирус имеет 3 группы онкогенности: малого риска – 6, 11 типы; среднего – 31, 33, 35 типы; высокого – 16, 18 типы.
Показания к применению
Необходимость в проведении диагностики путем ПЦР на ВПЧ возникает в случаях:
- Контакта с людьми, которые уже имеют положительную реакцию ПЦР на вирус папилломы человека – незащищенный половой акт, самостоятельные роды инфицированной мамы (возможно заражение ребенка), использование общих предметов личной гигиены (полотенца, мочалки), тесный кожный контакт.
- Наличия таких образований, как папилломы/кондиломы на половых органах – на ПЦР пациента направляет гинеколог/уролог, с целью диагностировать папилломавирусную инфекцию, то есть, обнаружить ВПЧ, определить его онкогенность.
- Скрининговые исследования с целью раннего выявления.
Плюсы и минусы анализа
ПЦР-диагностика ВПЧ часто используется гинекологами, урологами, дерматовенерологами. Что же это такое – ПЦР-исследование?
ПЦР (полимеразная цепная реакция) – увеличение количества определенных участков ДНК в биологическом материале для их идентификации, применяется в диагностике инфекционных, генетических болезней, обследования на скрытые инфекции, определения родства.
Плюсы:
- Высокий уровень специфичности.
- Высокая скорость выполнения, так как процесс автоматизирован – результаты не нужно ждать неделями.
- Один образец биоматериала можно использовать для диагностики нескольких заболеваний – достоверность анализа остается высокой.
- Высокий уровень чувствительности – обнаружение возбудителя инфекции даже при низкой концентрации в материале, что помогает начать проведение специфической профилактики.
Минусы:
- Риск ложноположительного результата – анализ сдан несвоевременно, например, материал взят сразу после лечения, когда инфекция ликвидирована, но погибшие клетки еще остались. Метод ПЦР не отличает мертвые клетки от живых.
- Риск ложноотрицательного результата – причиной являются нарушения технологического процесса:
- Неправильное хранение и транспортировка биоматериала.
- Несоблюдение правил сохранения стерильности проб.
- Просроченные/некачественные реагенты.
Выбор методики осуществляет лечащий врач
Виды анализа
Существует 4 вида анализа на папилломавирус методом ПЦР. Выбор методики осуществляет лечащий врач.
Методы проведения исследования:
- Качественный – данный способ проведения ПЦР выявляет ВПЧ, определения штамма вируса не происходит.
- Генотипирование – более глубокий анализ на ВПЧ, то есть, идентификация штамма.
- Комбинированный – метод, включающий в себя полимеразную цепную реакцию, имеющий узкую направленность – нацелен на поиск 16 штамма.
- Количественный – определяет число вирусных тел.
Генотипирование папилломавирусов
Генотипирование папилломавирусов проводят для прогнозирования динамики болезни. Целью типирования ВПЧ является не только найти вирус – важно идентифицировать штамм. Если найдено несколько штаммов – прогноз считают неблагоприятным, высока вероятность персистенции инфекции. Применяется для мониторинга эффективности противовирусной терапии. Также можно определить, является ли положительный результат качественного анализа следствием остатка ДНК возбудителя после проведенного лечения либо нового заражения (выявится новый тип, отличный от того, который определялся перед началом лечения). Результат формулируется как и в качественном методе.
Качественный способ
Определение наличия ВПЧ без установления принадлежности к какому-либо штамму, имеет значение при первичной диагностике. Результаты формулируются как “обнаружен”/”не обнаружен”.
Количественное определение и комбинированный метод
Количественный анализ – подсчет содержания вирусных тел в биологическом материале (число вирусов на 100 000 клеток). Данный вид тестирования применяется для установления тяжести процесса, назначения терапии. Суть – определение количества ВПЧ в 100 тыс. клеточных единиц биоматериала (соскоба). Меньше 3 – содержание вируса низкое, больше 5 – высокое (повышена вероятность озлокачествления).
Комбинированный метод (сочетает в себе качественный и количественный) – целенаправленный поиск 16 штамма, являющегося высокоонкогенным. Используется в ситуациях, когда врач подозревает наличие вируса высокой степени риска. Итог исследования имеет формулировки “не обнаружен”, “обнаружен штамм 16”, “обнаружен ВПЧ, в том числе штамм 16”.
ВКР-скрининг — массовая плановая диагностика на папилломавирус с целью раннего выявления
ВКР-скрининг – что это такое и как проводится
ВКР-скрининг — массовая плановая диагностика на папилломавирус с целью раннего выявления. В исследовании на ВПЧ ВКР у женщин участвуют лица старше 25 лет (по некоторым данным – с 21 года/спустя 3 года после начала половой жизни; при сильной сексуальной активности, большом количестве партнеров – с 18 лет). Рекомендуется проходить 1 раз в 3 года в ходе диспансеризации. В процессе мероприятия выявляются вирусы высокого риска, представляющие опасность тем, что могут вызывать развитие рака шейки матки. Определение концентрации ДНК при ВПЧ высокого онкогенного риска проводится методом ПЦР.
Этапы скрининга:
- Мазок на цитологию по Папаниколау (ПАП-тест). Для проведения теста берут материал из канала шейки матки (зоны трансформации – места перехода цилиндрического эпителия в многослойный плоский) в ходе осмотра, который наносят на стекло/в емкость со специальной жидкостью (тогда забор мазка производят щеточкой). Затем материал после окрашивания изучают под микроскопом на наличие атипичных клеток, если они есть – тест положительный. Метод также называют цитологическим.
- ПЦР – определение наличия вируса. Реакцию проводят тем, у кого получен положительный результат ПАП-теста. Для исследования можно применять материал мазка, кровь, мочу.
- Расширенный скрининг – определение типа и количества ВПЧ высокого риска онкогенности (Дайджин-тест – число вирусных тел на 100тыс. клеток: до 3 – концентрация малая, 3-5 – средняя, больше 5 – высокая).
Забор материала осуществляют как для ПАП-теста.
Правила подготовки к сдаче
За 2 дня до проведения нужно воздержаться от секса
- За 2 дня до проведения нужно воздержаться от секса, приема любых медикаментов, спринцевания, вагинальных свечей, таблеток.
- Мазок на ПЦР сдают в первую фазу цикла, после менструации.
- В период обострения хронических инфекционных патологий, после приема антибиотиков забор материала не проводится.
Правила сдачи крови/мочи:
- Кровь – сдается из вены утром натощак, за несколько дней до анализа из рациона исключают аллергены (шоколад, цитрусовые и т.д.).
- Моча – для анализа ПЦР на ВПЧ нужно сдать натощак утреннюю мочу (последний прием пищи – 8 часов назад) в стерильный контейнер. Доставить контейнер в лабораторию нужно в течение 4 часов после забора материала.
Как сдавать мужчинам и женщинам
Для исследования возможно использование практически любого человеческого биоматериала – крови, мочи, мазка, соскоба. Правила сдачи крови и мочи у мужчин и женщин не отличаются.
Отличается методика взятия мазка:
- Как сдавать анализ женщине – соскоб делается щеточкой, круговым поступательным движением из мочеиспускательного канала/ влагалища/цервикального канала.
- Мужчине – соскоб щеточкой делают с головки члена, мочеиспускательного канала.
Перед забором мазка нужно обеспечить соблюдение правил личной гигиены.
Расшифровка результатов
Трактовка полученных результатов проводится в зависимости от использованного метода:
- Качественный – наличие/отсутствие – “обнаружен”/”не обнаружен”.
- Генотипирование – обнаружение какого-либо конкретного штамма – “обнаружен”/”не обнаружен”.
- Комбинированный – обнаружение 16 штамма – “не обнаружен”, “обнаружен штамм 16”, “обнаружен ВПЧ, в том числе штамм 16”.
- Количественный:
Подсчет количества вирусных тел на 100 тыс. клеток биоматериала (соскоба):
- <3 – содержание низкое (вероятность рака низкая)
- 3-5 – средняя
- >5 – высокая (высокая вероятность рака)
Методы лечения
Для лечения ВПЧ применяют противовирусные препараты
- Хирургический – удаление папиллом, кондилом, бородавок:
- Лазером (лазерная деструкция/коагуляция).
- Радиоволновым излучением.
- Электроножом.
- Прижигание бородавок жидким азотом (криодеструкция).
- Применение средств, действующих локально, для некротизации патологических элементов – веррукацид, суперчистотел, подофиллотоксин 0,5%. После проведения хирургического лечения назначают противовирусные, иммуномодулирующие препараты.
- Противовирусные препараты – Изопринозин, Виферон, Панавир, Генферон, Кипферон.
- Укрепление иммунитета – Иммунал, Полиоксидоний, Галавит.
Противовирусные и иммуностимуляторы выпускаются в форме таблеток, свечей. Длительность курса определяется лечащим врачом, как правило, 10-14 дней, по необходимости продляется.
При изъязвлении/воспалении образований проводят противовоспалительное лечение – обработка антисептиками (например, хлоргексидином, мирамистином), антибиотиками, противовирусными мазями. Сильно воспаленную папиллому лучше удалить хирургически.
Возможно использование народных методов лечения после консультации с лечащим врачом. Народные методы лечения имеют 2 направления:
- Удаление образований. Наружно используется настойка чистотела, сок одуванчика/сырого картофеля – смазывать дважды в сутки. Папиллома отпадает примерно через 1,5-2 месяца.
- Укрепление иммунной системы – можно проводить на протяжении всего заболевания. Рекомендуют:
- Отвары – еловой хвои/лука репчатого с добавлением меда.
- Чаи – шиповник, мелисса, иван-чай, мята, липовый цвет, кориандр.
- Сухофрукты – смесь из грецких орехов, сушеных абрикосов, изюма, лимона с медом.
Видео
Анализ ПЦР на ВПЧ.
Источник
Информация об исследовании
ВЫСОКИЙ РИСК РАЗВИТИЯ РАКА (вызывает опухоли области головы и шеи, РАК шейки матки, прямой кишки, полового члена, легких). Выдается ИНДИВИДУАЛЬНЫЙ КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ РЕЗУЛЬТАТ по КАЖДОМУ ТИПУ.
Вирусы папилломы человека (ВПЧ) – широко распространенная и наиболее вариабельная группа вирусов, инфицирующих человека. Это маленькие безоболочечные ДНК-вирусы, являющиеся представителями семейства Papillomaviridae. В настоящее время идентифицировано более 100 типов ВПЧ, 80 из которых хорошо описаны. Количественное определение высокоонкогенных типов ВПЧ (16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59) рекомендовано рядом международных организаций (ASCCP, ESIDOG, EUROGIМ, ECOG, WHO) и российской группой экспертов («Профилактика рака шейки матки», руководство для врачей).
Вирус папилломы человека относится к семейству Papillomaviridae. Вирионы не имеют оболочки и содержат ДНК. Более 30 типов ВПЧ могут инфицировать эпителиальный слой урогенитального тракта. В зависимости от онкогенного потенциала выделяют вирусы высокого (типы 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59) и низкого (типы 6, 11, 42, 43, 44) онкогенного риска. Основной путь передачи возбудителя — половой (генитально-генитальный, мануально-генитальный, орально-генитальный), однако возможна передача и при непосредственном соприкосновении (кожный контакт). Риск передачи даже при однократном половом контакте равен 80%, особенно у девушек, не достигших половой зрелости. В период полового созревания у девушек естественным состоянием шейки матки является биологическая трансформация эктопированного на влагалищную порцию шейки матки цилиндрического эпителия, что облегчает проникновение вирусных частиц в клетки. ВПЧ обладает тропностью к эпителиальным тканям (кожа, слизистые оболочки) вне зависимости от их локализации и проникает в клетку через микроскопические порезы и потертости (дефекты). Несмотря на то, что большинство людей на протяжении жизни инфицируются этим возбудителем, чаще всего инфицирование заканчивается самопроизвольной элиминацией вируса из организма. Тем не менее у 5–10% пациентов ВПЧ персистирует, что в конечном итоге может приводить к появлению доброкачественных или злокачественных изменений кожи и слизистых оболочек. Вирус папилломы человека — единственный вирус, который не проникает в кровь, вследствие чего инфекционный процесс протекает без развития воспалительной реакции. Перенесенная ПВИ не защищает от повторного инфицирования. Средняя продолжительность времени между первичным инфицированием ВПЧ и развитием РШМ составляет 20 лет. В целом персистирующая ПВИ заканчивается раком лишь в 1,5% случаев. Лучшей профилактикой рака шейки матки является организованный скрининг – систематическое тестирование у бессимптомных женщин, так как эффективных лекарственных препаратов от вируса папилломы, вызывающего заболевание, нет.
Факторы риска ВПЧ-инфекции:
- Сексуальное поведение (раннее начало половой жизни, большое количество половых партнеров);
- Другие ИППП (хламидиоз, гонорея, трихомониаз, сифилис, инфицированность вирусом простого герпеса, вирусом иммунодефицита человека, цитомегаловирусная инфекция и др.);
- Изменения иммунного статуса;
- Терапия сопутствующей патологии цитостатиками (онкологических заболеваний, состояний после трансплантации органов).
Анализ ВПЧ (типы 16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59) колич. позволяет:
- контролировать адекватность забора материала по наличию в образце достаточного количества эпителиальных клеток, что обеспечивает высокую чувствительность и специфичность теста;
- определять суммарное количество всех типов;
- динамически наблюдать за вирусной инфекцией и более точно прогнозировать ее развитие.
Исследование для выявления возбудителя папиллома-вирусной инфекции проводится с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (Real-Time) определяется генетический материал (ДНК) вируса и его количество (вирусная нагрузка) в образце, полученном из урогенитального тракта.
Показания к назначению исследования
Определение группы риска по развитию рака шейки матки
женщинам от 21 года, находящимся в группе риска по заражению ВПЧ
Скрининговые программы с цитологическим исследованием для женщин старше 30 лет
Обследование при неопределенных и сомнительных результатах цитологических исследований
Контроль эффективности терапии тяжелой дисплазии шейки матки (CIN II ) через 6 месяцев после удаления пораженного эпителия
Проведение дифференциальной диагностики с заболеваниями не папилломавирусной этиологии
Подготовка к исследованию
За 2 недели исключить прием противовирусной терапии
За 3 дня влагалищные формы лекарственных средств, интравагинального УЗИ и кольпоскопии
За сутки исключить половой контакт
Не должно быть менструальных выделений (рекомендовано либо за 5 дней до начала менструации, либо через 5 дней после окончания)
Беременным до 22 недель берет медицинская сестра если нет угрозы, с 22-30 недели -если нет угрозы, берет гинеколог по записи, с 30 недели только принесенный материал.
Соскоб из урогенитального тракта (у мужчин – уретра) рекомендуется сдавать через 2 часа после последнего мочеиспускания.
Источник