Количественное определение впч высокого канцерогенного риска

[09-184]
Human Papillomavirus высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68 типы), ДНК количественно, скрининг с определением возможности интеграции вируса в геном [реал-тайм ПЦР]

850 руб.

Исследование используется для диагностики папиллома-вирусной инфекции, с одновременным определением количества вирусной ДНК в исследуемом материале. Анализ позволяет сделать вывод о степени поражения слизистой, оценить эффективность терапии в процессе лечения. Определяется суммарное количество ДНК 14 типов ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР) с отдельным определением ДНК ВПЧ 16-го, 18-го и 45-го генотипов. Тест также позволяет оценить вероятность интеграции ВПЧ 16-го, 18-го и 45-го типа в геном человека (что является опасным и прогностически неблагоприятным фактором).

Синонимы русские

Папиллома-вирусы высокого канцерогенного риска, вирусы папилломы высокого канцерогенного риска, ВПЧ высокого канцерогенного риска.

Синонимы английские

Human Papillomavirus, DNA; HPV, Viral Load.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Соскоб урогенитальный.

Как правильно подготовиться к исследованию?

• Женщинам исследование рекомендуется производить до менструации или через 2-3 дня после её окончания.
• Мужчинам не мочиться в течение 3 часов до взятия урогенитального мазка.

Общая информация об исследовании

Вирусы папилломы человека (ВПЧ) представляют собой широко распространённую и вариабельную группу вирусов, поражающих эпителий кожи и слизистых оболочек и обладающих онкогенным потенциалом. ВПЧ передаётся при тесном контакте с инфицированным эпителием, поэтому основные пути заражения – половой и контактно-бытовой. Возможна передача ВПЧ от инфицированной матери к плоду.

К факторам, провоцирующим развитие ВПЧ-инфекции, относятся ранее начало половой жизни, большое количество половых партнеров, сниженный иммунитет, применение оральных контрацептивов, авитаминозы, инфекции, передаваемые половым путём, курение и проживание в крупных городах.

Инкубационный период может длиться от 2 месяцев до 2-10 лет. Характерно скрытое течение заболевания, при котором отсутствуют клинические проявления, а при кольпоскопическом, цитологическом и гистологическом обследовании выявляется норма. В 30 % случаев в течение 6-12 месяцев может произойти избавление от вируса. Диагностика скрытой ВПЧ-инфекции осуществляется только методом ПЦР.

ВПЧ может по-разному воздействовать на эпителий: способствовать возникновению доброкачественных образований (папиллом, кондилом) или объединению ДНК папиллома-вируса с геном клетки, что приводит к дисплазии (неоплазии) и в дальнейшем к раку (чаще всего в переходной зоне шейки матки).

К папиллома-вирусам высокого онкогенного риска относятся ВПЧ типов 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 66, 68. 

Для выявления возбудителя используется метод полимеразной цепной реакции, которая позволяет обнаружить ДНК вируса. Принцип метода основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка ДНК.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять генетический материал возбудителя на ранних этапах заболевания. Он характеризуется высокими показателями диагностической чувствительности и специфичности, быстротой получения конечного результата и доступностью. Особенностью метода является возможность выявлять ДНК вируса даже при малом содержании её в исследуемом биологическом материале. Метод основан на многократном увеличении числа копий специфичного для данного возбудителя участка ДНК. Для диагностики может использоваться разнообразный биологический материал, взятый у детей, взрослых лиц, людей с патологией иммунной системы, беременных женщин. Метод позволяет определять количество молекул ДНК исследуемого вируса, что является важным в диагностике острой формы инфекции, реактивации персистентной инфекции, носительстве вируса, а также при контроле эффективности проводимой противовирусной терапии.

По данным исследований, количественное содержание вируса в материале коррелирует со степенью неоплазии: чем выше вирусная нагрузка, тем выраженнее цитологические изменения в эпителии. При обследовании необходимо учитывать генотип вируса, наличие и степень цитологических и гистологических изменений в тканях, увеличение или снижение вирусной нагрузки через несколько месяцев (6 месяцев и более) после предыдущего обследования.

В исследовании проводится определение суммарного количества ДНК 14 типов ВПЧ высокого канцерогенного риска (ВКР) с отдельным определением ДНК ВПЧ 16, 18 и 45 генотипов. ВПЧ ВКР являются главной этиологической причиной развития РШМ и предшествующей ему тяжелой дисплазии. ВПЧ обнаруживается в 95 % случаев РШМ, из них 16, 18, 45 генотипы в совокупности являются причиной 75 % плоскоклеточных раков и 94 % аденокарцином шейки матки.

Известно, что развитие РШМ часто ассоциировано с интеграцией ДНК вируса в геном клетки-хозяина. Наиболее часто интегрируют ВПЧ 16 и 18 генотипов, при этом происходит разрыв участка Е1/Е2 при сохранении онкогена Е6/Е7. В тест-системе, на которой выполняется данное исследование, по разным каналам прибора детектируются разные участки генома ВПЧ 16, 18 и 45 типов. Выявление области Е6 при отсутствии области Е1/Е2 позволяет косвенно судить о возможности интеграции вируса в геном человека. В случае обнаружения возможности интеграции вируса в геном в бланк ответа выводится соответствующая информация.

Для чего используется исследование?

• Чтобы оценить риск развития новообразований, ассоциированных с ВПЧ (рак шейки матки, рак прямой кишки, рак аногенитальной области и других локализаций).
• Для контроля за эффективностью лечения предраковых заболеваний, ассоциированных с ВПЧ.
• Для мониторинга папиллома-вирусной инфекции и прогнозирования ее течения.

Когда назначается исследование?

• При выявлении цитологических изменений в мазке на атипию, в мазке по Папаниколау, в гистологическом препарате.
• При кондиломах и других морфологических изменениях половых путей.
• При скрининге рака шейки матки у женщин старше 25-30 лет (в качестве дополнительного исследования).
• При наблюдении за инфицированными ВПЧ.
• При лечении рака и предраковых состояний, ассоциированных с ВПЧ.

Что означают результаты?

Уровень вирусной нагрузки интерпретируется с учетом результатов цитологического исследования мазков, гистологических изменений в биоптате и генотипа вируса, изменении его количества с течением времени.

• Количество ДНК ВПЧ не определяется при отсутствии вируса в исследуемом образце или его минимальном количестве (ниже детектируемого уровня) – риск развития патологического процесса, связанного с ВПЧ, минимальный.
• Клинически малозначимая концентрация вируса (менее 103 копий ДНК ВПЧ на 105 клеток) – минимальный риск развития дисплазии, транзиторное течение вирусного процесса.
• Клинически значимая концентрация вируса (более 103 копий ДНК ВПЧ на 105 клеток) – хроническая инфекция с высоким риском развития дисплазии и РШМ.
• Более 105 копий ДНК ВПЧ на 105 клеток при установленном факте персистентного течения инфекции (ВПЧ выявляется более 1 года) – усиленная вирусная нагрузка, ассоциированная с повышенным риском тяжелой дисплазии, часто встречается при РШМ.
• Снижение вирусной нагрузки в 10 раз за 6 месяцев – транзиторная инфекция.
• Рост вирусной нагрузки через 6 и более месяцев после лечения указывает на возможность рецидива.



Важные замечания

• Инфицирование ВПЧ не всегда приводит к раку шейки матки.
• Возможно одновременное заражение несколькими генотипами ВПЧ.
• Результат анализа должен интерпретироваться с учетом заключений цитологического и гистологического исследований.

Также рекомендуется

• Human Papillomavirus 16/18 (HPV 16/18), ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Human Papillomavirus 6/11 (HPV 6/11), ДНК [реал-тайм ПЦР]
• Human Papillomavirus высокого канцерогенного риска (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 типы), ДНК генотипирование [реал-тайм ПЦР]
• Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала – окрашивание по Папаниколау (Рар-тест)
• Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала на атипию
• Антиген плоскоклеточной карциномы (SCCA)

Кто назначает исследование?

Акушер-гинеколог, дерматовенеролог, уролог, инфекционист, проктолог, педиатр, ЛОР.

Литература

• Arbyn M. et al. (2010). “European Guidelines for Quality Assurance in Cervical Cancer Screening. Second Edition–Summary Document”. Annals of Oncology 21 (3): 448–458.
• Hsiu-Ting Tsai, Ching-Hu Wu, Hsiao-Ling Lai, et al. Association between Quantitative High-Risk Human Papillomavirus DNA Load and Cervical Intraepithelial Neoplasm Risk Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2005;14:2544-2549.
• Saslow D, Solomon D, Lawson HW, et al. American Cancer Society, American Society for Colposcopy and Cervical Pathology, and American Society for Clinical Pathology Screening Guidelines for the Prevention and Early Detection of Cervical Cancer. Am J Clin Pathol. 2012;137:516-542.
• “Genital HPV Infection – CDC Fact Sheet”. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). April 10, 2008. Retrieved 13 November 2009.
• Материалы и рекомендации Противоракового Общества России. Режим доступа: https://www.pror.ru/

Папилломавирусы (вирусы папилломы человека, ВПЧ, HPV) – возбудители, обладающие онкогенным действием, т.е. способностью вызывать развитие злокачественных опухолей. Анализ на онкогенные ВПЧ – важнейшая часть диагностики многих онкологических заболеваний.

Согласно научным данным, эти микроорганизмы связаны с 100% случаями рака шейки матки, 90% случаями рака цервикального канала и более 50% случаев злокачественных опухолей мочевого пузыря, прямой кишки, аногенитальной области. Вирус также провоцирует онкопатологии глотки и ротовой полости. 

В Университетской клинике можно сдать анализы на онкогенные ВПЧ, наиболее часто вызывающие злокачественные опухоли.

Что такое онкогенные ВПЧ и почему их нужно обнаруживать

Папилломавирусы делятся на типы (штаммы), отличающиеся своей онкогенностью – способностью вызывать предраковые и раковые заболевания. Этот показатель может быть высоким, низким и средним. Существуют папилломавирусы, практически не провоцирующие опухоли.

Поэтому, выявив штамм возбудителя, можно понять, насколько он опасен в плане возникновения рака. Чаще всего онкологию вызывают штаммы 16, 18, 31, 33, 39, 50, 59, 64, 68, 70. Перечень наиболее опасных папилломавирусов постоянно пополняется, поскольку учёные открывают новые типы возбудителей, а у некоторых, ранее считавшихся менее опасными, обнаруживается высокая способность провоцировать опухоли.

Онкологию могут вызвать не только высоко – но и среднеонкогенные вирусы. Поэтому их высокая концентрация также опасна. Коварны и низкоонкогенные штаммы, вызывающие развитие бородавок на коже и слизистых, а также некоторых кожных заболеваний. Поэтому в комплексные методы диагностики, кроме выявления самых онкогенных штаммов, включают определение некоторых типов возбудителей с более низкой опухолевой активностью.

Как ВПЧ провоцирует рак

Возбудитель, попадая в организм, внедряется в клетки эпителия – ткани, покрывающей кожу и слизистую органов. Отличительной чертой вирусов, в том числе папилломавируса является способность превращать чужие клеточные элементы в «инкубатор», производящий новые болезнетворные микроорганизмы.

В клетках-хозяевах болезнетворный организм хранит свою «вирусную базу», продуцирует белки, необходимые для его жизнедеятельности и собирает готовые вирусные частицы – вирионы. Поэтому поражение постоянно усиливается и проникает вглубь тканей.

Заражение отрицательно влияет на процесс деления и созревания клеток органа, где он «обосновался». Из-за его губительного действия образуются неправильно развитые клеточные элементы, отличающиеся от нормальных строением, размером, формой.

Изменяется центральный элемент клетки – ядро, которое становится слишком большим, маленьким, деформированным. Некоторые поражённые клетки содержат два ядра. Поскольку это элемент содержит генетическую информацию, важную для процесса клеточного деления, в тканях появляются фигуры атипичного митоза – атипичные клетки, которые не могут правильно разделиться.

Неправильно развитые (атипичные) клетки, занимают среднее положение между здоровыми и злокачественными. Такое состояние называется дисплазией или предраком. На поверхности органа они образуют очаг измененной ткани. Поверхность эпителия меняется, становясь зернистой. В тяжелых случаях она приобретает вид «булыжной мостовой».

Дисплазия лучше проявляется, если смазать эпителий слабым раствором уксуса или йодным раствором. Поступает светлое пятно, на котором видны неправильно развитые расширенные сосуды.

По мере воздействия вируса проявления атипии – отличия клеток от здоровых, усиливаются. Вначале наблюдается лёгкая атипия (LSIL), при которой клеточные элементы максимально сохраняют сходство со здоровыми. Затем она становится более тяжёлой (HSIL), и клетки приобретают злокачественные черты. В результате предраковое поражение переходит в злокачественную опухоль. Процесс трансформации может занять от нескольких месяцев до нескольких лет. Спрогнозировать это процесс сложно, но, как правило, больше возбудителей содержится в тканях, тем быстрее развивается онкология. Поэтому чтобы не допустить развития онкологии, нужно как можно раньше выявить вирус, определить его концентрацию и начать лечение.

Прогрессирование заболевания от инфицирования ВПЧ до развития рака шейки матки

Обнаружение папилломавирусной инфекции до начала выраженного перерождения клеток, позволяет вылечиться с помощью лекарств без хирургических методов. Именно поэтому так важно своевременное проведение лабораторной диагностики высокоонкогенных папилломавирусов.

Наиболее распространенные варианты анализов на онкогенные ВПЧ (HPV)

Для выявления папилломавирусов используются ДНК-методы, выявляющие возбудителей по фрагментам их генного материала. Все эти лабораторные исследования можно схематически разделить на группы:

• Качественные – выявляющие присутствие определённых штаммов.
• Количественные – показывающие наличие вирусов и их концентрацию.
• Типирование – определение типа папилломавируса.

Существуют комплексные исследования, во время которых определяется наличие возбудителей, их штамм и концентрация. От объема полученных данных зависит сложность диагностики ВПЧ и её цена.

В каких случаях проводятся анализы на онкогенные ВПЧ

• Обнаружение на шейке матки, во влагалище или на слизистой других органов подозрительных очагов, напоминающих предраковые и раковые поражения. Лабораторная диагностика необходима, поскольку изменения могут быть вызваны не папилломавирусом, а другими заболеваниями – кожными патологиями, доброкачественными опухолями, инфекциями, в том числе венерическими, например, сифилисом или мягким шанкром.
• Обнаружение в мазках на рак и предрак по Папаниколау атипичных клеток. Дает возможность выявить тип вирусов, вызвавших изменения, и определить их онкогенность.
• Мониторинг лечения папилломавирусной инфекции. Лабораторная диагностика показывает эффективность терапии.
• Наблюдение после лечения. Вирусы могут сохраняться в эпителии длительное время, вызывая рецидивы – повторное проявление заболеваний. Поэтому после излечения нужно периодически проходить обследоваться.
• Скрининг шейки матки. Профилактическое исследование, которые желательно периодически проходить любой женщине. Диагностика выявляет заражение даже при отсутствии жалоб и изменений на шейке матки.

Как подготовиться к анализу на онкогенные ВПЧ

• За двое суток взятия материала исключаются интимные контакты, искажающие результат диагностики.
• За сутки до обследования следует отказаться от спринцеваний и введения лекарств во влагалище. Лекарственные препараты делают взятый материал “грязным”, а спринцевание “вымоет”, клетки эпителия в том числе, зараженные ВПЧ онкогенного типа, находящиеся на поверхности слизистой.
• Материал не берется во время менструации, сразу после родов и аборта – из-за примеси крови результаты будут неточными.
• Между проведением трансвагинального УЗИ с введением датчика во влагалище и взятием биоматериала должно пройти не менее 48 часов. Иначе образец загрязнится гелем, используемым при ультразвуковой диагностике. Поэтому при совпадении сроков процедур сначала берется материал для лабораторной диагностики, а потом проводится УЗИ.
• Перед забором биоматериала из уретры нельзя мочиться в течение 2-3 часов, иначе вытекающая урина смоет вирусные частицы.

Как берется материал для анализа на онкогенные штаммы

Для обнаружения возбудителя берется соскоб:

• С поверхности шейки матки.
• Из цервикального канала.
• Со стенок влагалища.

С поверхности мочеиспускательного канала – этот анализ на ВПЧ онкогенного риска проводится мужчинам и женщинам при подозрении на раковые и предраковые патологии мочевого пузыря и уретры.

Соскобы у женщин берутся на гинекологическом кресле, а у мужчин – на кушетке:

• Материал с поверхности шейки матки и цервикального канала берётся специальным устройством цитощеткой, оснащённой съемной головкой. После проведения соскоба нижняя часть щеточки отделяется и помещается в специальный раствор для транспортировки в лабораторию.
• Со стенки влагалища образцы берут при помощи специального зонда – тампона или комбинированного зонда, снабженного мягкой частью. Нижний сегмент устройства вместе со взятым материалам отделяется и помещается в транспортировочную жидкость.
• Соскоб из мочеиспускательного канала берётся при помощи тонкого зонда со съемной частью, которая также отделяется и кладется в раствор.

Цитощетка цервикальная

Каждая порция помещается в отдельную емкость и маркируется. Может быть взят один соскоб или несколько – все зависит от конкретного заболевания. Все образцы отправляют в лабораторию.

Исследование на штаммы ВПЧ высокого онкогенного риска безвредно, безболезненно и не сопровождается нарушением целостности тканей. В Университетской клинике проводятся различные варианты таких анализов. Выбрать наиболее подходящий вариант можно, проконсультировавшись у врача гинеколога или уролога.

Как проводится анализ на онкогенные ВПЧ

В лаборатории полученный материал очищают от примесей. С помощью специальных растворов из него выделяют ДНК возбудителя. В дальнейшем исследование проводят двумя методами:

• С помощью ПЦР-методики, которую иначе называют реал-тайм ПЦР или амплификацией мишени. При её проведении объём полученного материала многократно увеличивают – амлифицируют. Это достигается репликацией – созданием копий – реплик генетических фрагментов. Зачем ДНК соединяют с реактивами, реагирующими, определенные штаммы вирусов. В результате обнаруживаются соединения, выявляемые лабораторным путем. Их наличие и говорит о присутствии вируса.
• С помощью амплификации сигнала – методов гибридного захвата, Digene-теста, Hybrid Capture Technology. В этом случае вещества-гибриды, которые получаются при соединении реактивов и генетического материала, с помощью лабораторных методов заставляют светиться. Это свечение усиливают (амплифицируют) и обнаруживают специальным прибором. По параметрам свечения определяют присутствие вируса и его тип – штамм.

Полимеразная цепная реакция

При проведении количественного исследования с помощью компьютерной программы анализируется объём полученного генетического материала и сила свечения гибридов. По ним и определяют количество вируса.

ДНК – методы позволяют проводить типирование вируса. Для этого применяются реактивы, реагирующие на определенный штамм возбудителя. Точность генетических исследований приближается к 100%.

Какие сведения указываются в результатах анализа на онкогенные ВПЧ и как его расшифровать

В бланке результатов указываются:

• Фамилия, имя, отчество, пациента, его пол и возраст.
• Область, откуда был взят мазок
• Даты взятия и исследования образца.
• КВМ – контроль взятия материала. Это показатель качества соскоба, указывающий на концентрацию клеток в нем. В норме он должен быть не менее 4 Lg. Меньший показатель говорит о небольшом содержании клеток в образце и его низкой информативности. В этом случае соскоб берётся заново.
• Абсолютная вирусная нагрузка – количество онкогенных вирусов. Измеряется в Lg (абсолютных копий) /10^ 5 клеток эпителия, которые поражает папилломавирус. Вирусная нагрузка менее 3 Lg нередко игнорируется, поскольку в таких количествах микроорганизм не вызывает болезней. В бланке результатов ставится отметка, что папилломавирус не обнаружен. В остальных случаях указывается концентрация возбудителя.
• Общая вирусная нагрузка – сумма концентраций каждого штамма. Ее высокий уровень, даже если концентрация каждого из типов онкогенных ВПЧ небольшая – неблагоприятный результат.
• Относительная вирусная нагрузка – отношение общего количества клеток в образце к абсолютной вирусной нагрузке. В норме она должна отсутствовать. Отрицательный показатель говорит о наличии папилломавируса в спящем (неактивном) состоянии. Положительный показатель свидетельствуют о развитии вирусного процесса и высоком риске возникновения рака.

Показатели абсолютной вирусной нагрузки

Поделиться ссылкой: