Как делают пцр на впч

Автор статьи

Практикующий-дерматовенеролог, окончил Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова.

Вирус папилломы человека (ВПЧ) – распространенное заболевание, протекание которого носит хронический характер и чревато рецидивами. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) – один из самых современных способов диагностики папилломавируса. Этот способ считается надежным и позволяет выявить не только наличие вируса в организме, но также его тип и количество. ПЦР чувствителен даже к неактивной форме вируса, при которой отсутствуют внешние проявления в виде папиллом и кондилом.

Общие сведения

анализ пцр на впч Анализ строится на исследовании ДНК пациента с целью обнаружения в ней присутствия чужеродных элементов. Любая ДНК строится на основе четырех нуклеотидов, располагающихся в определенной последовательности. Когда в организм попадает вирус, происходит изменение порядка в этой цепи, что позволяет оперативно отследить деятельность даже незначительных инородных частиц. Метод ПЦР диагностики проводится с использованием вирусных частиц, что обусловливает быстрое деление клеток.

Такая диагностика способна отследить активность ВПЧ не только в момент его протекания в скрытой фазе, но и в инкубационный период, когда папилломавирус еще не успел заявить о себе. ПЦР позволяет выявить:

наличие ВПЧ;
штаммы, которыми инфицирован больной;
количественное содержание вируса в организме.

Большинство людей инфицированы папилломавирусом, однако сильный иммунитет подавляет его проявления и не дает размножаться. Поэтому обнаружение ВПЧ качественным методом может быть не всегда оправдано. Это не рационально в случае, если вирус присутствует в организме, но его воздействие минимально и никак не вредит человеку. Тем не менее качественный анализ покажет положительный результат, чем может вести пациента в замешательство.

Поэтому для диагностики чаще всего применяют количественный метод, позволяющий отследить количество вируса в организме и определить, насколько опасна его деятельность. Кроме того, важно установить штамм ВПЧ. Они делятся по степени онкогенности: одни совершенно безопасны и способны вызывать только косметические проблемы, другие могут стать причиной возникновения рака. штаммы вируса папилломы человека

Каждая ситуация требует индивидуального подхода, поэтому прежде чем сдавать анализ, желательно проконсультироваться с врачом. Он подскажет, каким методом и на какие штаммы лучше всего проверяться, исходя из состояния пациента.

Показания для анализа

Инфицирование ВПЧ возможно только при непосредственном контакте с зараженным человеком. Вирус попадает в кровь и начинает размножение в области верхних слоев кожи, что обусловливает появление его характерных признаков – возникновение папиллом и кондилом. папилломы у мужчин и женщин ВПЧ распространяется следующими путями:

при незащищенных половых контактах;
при естественных родах от инфицированной матери к ребенку;
контактно-бытовым путем через предметы общего пользования, личные вещи, одежду и т.д.;
во время тесного контакта с кожей больного.

Чаще всего диагностировать ВПЧ приходят люди, у которых видны внешние признаки болезни. Однако если они никак не проявляются, это не является гарантией отсутствия вируса. Он также может присутствовать в крови и развиваться бессимптомно. Это особенно характерно для высокоонкогенных типов вируса: 16 и 18 штамма, которые провоцируют возникновение рака. Направление на диагностику этих типов обычно происходит при обращении к профильным специалистам: гинекологу и урологу. фото: впч высокого онкогенного риска у женщин

Преимущества метода

ПЦР считается одним из главных методов диагностики и остается самым востребованным среди врачей. Он используется не только для выявления ВПЧ, но также помогает обнаруживать другие заболевания, передающиеся половым путем, гепатиты, скрытые инфекции и т.д. ПЦР диагностика обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами выявления заболеваний. Среди них:

Высокая специфичность. Тест помогает с большой вероятностью отделить следы чужеродной ДНК от ДНК человека в рамках собранного материала.
Высокая производительность. ПЦР представляет собой автоматизированный процесс, помогающий провести диагностику непосредственно в день сдачи анализа. Такая скорость исследования позволяет пациенту не волноваться о результате на протяжении долгого времени и получить результат уже через несколько дней.
Возможность сделать сразу несколько анализов. На основании одного собранного образца можно провести диагностику для выявления нескольких заболеваний. Например, одновременно можно выявить возбудителя хламидиоза и гонореи. При этом такая процедура не сможет отрицательно повлиять на достоверность результата.
Высокая чувствительность. Тест позволяет обнаружить деятельность вируса даже в инкубационный период, когда его концентрация очень мало. Это поможет предупредить развитие патологического процесса и начать своевременное лечение.

Недостатки метода

Существуют, однако, и некоторые отрицательные моменты в проведении ПЦР диагностики. Главный из них – возможность получения ложноположительного результата. Это происходит в случае, если лечение уже проведено, инфекция побеждена, но мертвые клетки еще остаются внутри тканей. Для обновления клеток необходимо время.

Читайте также: Пцр впч у мужчин

Если провести анализ раньше 2-3 месяцев, ПЦР может показать положительный результат, в действительности принимая уже мертвые клетки за живые. Метод не делает различий между ними, он нацелен на поиск ДНК вируса, которую может найти даже в уже отмерших клетках. Все это приводит к получению ложноположительного результата. Избежать такой ситуации можно, если сдавать анализ в установленный лечащим врачом срок.

Также существует риск ложноотрицательного результата. В этом случае пациент никак не может повлиять на качество диагностики, так как ложноотрицательный анализ – просчет лаборатории. Он может возникнуть если:

собранный материал неправильно транспортировался и хранился;
нарушается стерильность, и в полученные пробы попадают другие микроорганизмы;
реагенты были непригодными.

Для того чтобы исключить возможность получения ложноотрицательного результата, необходимо выбирать проверенную лабораторию с квалифицированным персоналом.

Виды методик

В рамках проведения ПЦР диагностики разработаны четыре метода тестирования. Каждый из них имеет свои особенности проведения и назначается, исходя из состояния пациента. Для выбора наилучшего способа необходимо проконсультироваться с врачом.

Качественный способ

Этот метод применяется для того, чтобы подтвердить или опровергнуть факт присутствия вируса в организме. Его основной недостаток – невозможность установить штамм ВПЧ (только 14-21 виды). Чаще всего качественный способ используется вместе с другими методами выявления папилломавируса. Результат при этом передается с помощью 2 оценок: «обнаружено» или «не обнаружено». То есть метод либо констатирует факт наличия чужой ДНК, либо показывает ее отсутствие.

Генотипирование

Методика способна определить как просто наличие вируса в организме, так и установить его вид. Этот способ применяют, когда необходимо установить, осталась ли вирусная ДНК после лечения или случился рецидив вследствие нового заражения. Генотипирование позволяет оценить эффективность проведенного лечения посредством определения вида вируса. Если этот тот же штамм, от которого лечился больной, значит, терапия прошла безуспешно. Если же исследование показывает другой вид ВПЧ, можно говорить о повторном заражении. Результат также представлен формулировками «обнаружено» или «не обнаружено».

Комбинированный метод

Узкоспециализированный способ диагностики, основанный на соединении качественного метода и определения 16 штамма посредством генотипирования. Результат представлен 3 ответами: «не обнаружено», «обнаружен 16 штамм», «обнаружен ВПЧ с 16 типом включительно». Этот метод применяется при подозрении на наличие высокоонкогенного типа папилломавируса, способного вызывать у женщин рак шейки матки.

Количественный метод

Такой способ позволяет установить концентрацию вируса в организме и отследить развитие ВПЧ. Считается наиболее информативным, так как позволяет определить тяжесть протекающего процесса, исходя из которой, подбирается лечение. Основан на определении количества вирусных клеток в рамках исследуемых 100 тысяч. Когда их совокупность превышает 5, это свидетельствует о высокой концентрации папилломавируса, что повышает возможность появления раковых клеток. Если количество клеток меньше 3, концентрация указывается как незначительная.

Как сдавать анализ

Специальной подготовки для проведения диагностики не требуется. Главное условие – не мочиться за несколько часов до процедуры. Желательно не вступать в половые контакты за 2-3 дня до обследования, а также не принимать алкоголь. При этом нельзя забывать о проведении процедур для поддержания интимной гигиены.

Как сдают анализ мужчины

взятие мазка у мужчин Головка полового органа вместе с мочеиспускательным каналом обрабатывается физ. раствором. Врач использует специальную щеточку, вставляемую примерно на 4 сантиметра. С помощью легкого вращения собирается материал для исследования с уретры. Полученный анализ оставляется в пробирке и отправляется на дальнейшее исследование в лабораторию. Биоматериал при этом может храниться не более 2 суток с момента получения.

Как сдают анализ женщины

взятие мазка у женщины

Перед взятием анализа на шейку матки наносят стерильный раствор. Затем с помощью щеточки берется мазок из цервикального канала. Приспособление оказывается на глубине около сантиметра, потом врач делает соскоб со стенок вращательными движениями. Биоматериал помещается в пробирку, где находится примерно 15 секунд. Там врач обтирает его об стенки, а затем вынимает. После этого содержимое пробирки отправляется на диагностику.

Забор биоматериала

Правильный забор материала – залог успешного проведения диагностики. Если при этом процессе нарушается стерильность, и в пробирку попадают чужеродные микроорганизмы, может произойти обнаружение «вируса», которого в действительности нет. Кроме того, ошибка может произойти из-за небольшого количества клеток, взятых на анализ.

Расшифровка анализа ПЦР

фото: данные пцр исследования

В зависимости от способа диагностики пациент увидит различные контрольные результаты. Графа «не обнаружено» свидетельствует о том, что вирус не присутствует в организме, либо его количество настолько незначительно, что не поддается обнаружению. Результат «обнаружено», соответственно, говорит о наличии патологического процесса.

Если пациент использовал количественный метод, расшифровка будет следующей:

Lg 5 и выше – показатель большой концентрации вируса;
Lg 3−5 – уровень вируса значительный, но не критический;
Lg меньше 3 – малозначимое количество вирусных клеток.

В любом случае точной расшифровкой должен заниматься врач, ведь на основании этого ставится диагноз. Кроме того, через какое-то время желательно повторить процедуру, чтобы исключить ложноотрицательный или ложноположительный результат.

Источник

По статистике, носителями вируса папилломы человека являются около 70% населения планеты, а по другим данным — до 95%. В некоторых случаях иммунитет сам уничтожает вирус, и человек даже не узнает о заражении.

Гораздо хуже, когда появляется симптоматика и значительно влияет на качество жизни. Чтобы не допустить самого серьезного последствия активации вируса — развития онкологических заболеваний — требуется диагностика и скорейшее лечение. Высокоточным методом диагностики является исследование ПЦР.

pchranaliz1

Полимеразная цепная реакция, типирование (количественно): что это такое?

Папилломавирус — возбудитель инфекционного заболевания, которое передается преимущественно половым путем. Вирус проникает от зараженного человека в здоровый организм и может долгое время оставаться незамеченным.

Когда иммунитет ослабевает (например, при гриппе, при беременности), защитных сил организма может не хватить, и тогда вирус проявляет активность: на коже или слизистых оболочках появляются папилломы — небольшие выросты на коже.

Казалось бы, чем могут быть опасны маленькие образования? ВПЧ бывают трех видов по степени опасности:

С низким онкогенным риском.
Со средним онкогенным риском.
С высоким онкогенным риском.

Степень онкогенности, по сути, это вероятность перерождения вируса в рак.

СПРАВКА! Женщины подвержены заражению больше, чем мужчины, поскольку их половые органы более уязвимы.

При появлении странных наростов человек обращается к врачу. Обычно специалист после визуального осмотра делает предположение о папилломавирусе, но на основании этого диагноз ставить нельзя. Назначается ряд анализов и исследований, среди которых особое место занимает ПЦР.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — современный достоверный метод молекулярно-генетической диагностики, позволяющий с высокой точностью определить присутствие возбудителя в организме (в данном случае ВПЧ).

Метод основан на изучении строения цепей ДНК одной из биологических сред человека (кровь, моча, слюна, мазок). В лабораторных условиях специалист изучает последовательность нуклеотидов ДНК и выделяет участки, в которых молекула построена «неправильно».

Иными словами, если порядок нуклеотидов в цепи ДНК нарушен, в ней присутствуют чужеродные объекты, и по этим «сломанным» участкам врач определяет ДНК вируса.

ПЦР определяется качественно или количественно. В первом случае в лабораторном бланке пишут «ВПЧ положительный» или «ВПЧ отрицательный» — определяется только его наличие или отсутствие.

Но качественный анализ не всегда оправдан: если вирус с низкой канцерогенностью присутствует в организме, но никак не беспокоит человека, положительный результат только напугает его.

Гораздо информативнее и более оправдан количественный анализ, который показывает не только присутствие ВПЧ, но и его активность, а также штамм вируса, по которому можно определить, есть ли риск возникновения онкологии.

Эффективность использования метода на выявление вируса папилломы человека

На сегодняшний день ПЦР считается одним из самых высокоэффективных методов диагностики папилломавируса. Главное, его достоинство в том, что он позволяет определить онкогенность вируса на молекулярном уровне.

vpch58

С помощью этого метода выявляются штаммы ВПЧ с высокой онкогенностью еще до появления первой симптоматики, потому что обнаруживается ДНК возбудителя, а не следы его присутствия.

ПЦР-диагностика позволяет определить:

Наличие вируса в организме с максимальной точностью.
Количество штаммов возбудителя.
Схожие архитектуры клеток патогенных частиц.

Кроме этого, расшифровка результатов не занимает много времени.

Плюсы и минусы анализа

К плюсам анализа относят:

Высокую специфичность. Тоесть с помощью данного метода с большой вероятностью можно отделить ДНК возбудителя от ДНК человека.
Высокую производительность. В современных лабораторных условиях доступны проведение анализа и расшифровка результатов за несколько часов.
Универсальность анализа. По желанию пациента можно на основании собранного биологического материала выявить возбудителей нескольких заболеваний (к примеру, хламидиоза и гонореи).
Высокую чувствительность. Результаты будут достоверными, даже если вирус находится в инкубационном периоде или его количество минимально. В этом случае огромным достоинством является возможность сразу же начать борьбу с вирусом и не допустить его активизации.

Наряду с плюсами, есть и несколько минусов:

Вероятность получения ложноположительного результата. Это один из главных недостатков вируса, но в то же время он практически не несет негативных последствий. Например, вирус обнаружен, курс лечения пройден, но в организме еще остаются мертвые клетки с ДНК возбудителя. В этом случае нужно провести повторный анализ через 2–3 месяца.
Вероятность получения ложноотрицательного результата. Данный недостаток — результат халатного отношения пациента к подготовке, к анализу либо нарушения условий забора и транспортировки биоматериала лаборантами или неправильной расшифровки. Подобная ситуация опаснее, чем ложноположительный результат, поскольку в этом случае лечение откладывается.

Именно по этим причинам рекомендуется проходить диагностику только в проверенных учреждениях, а некоторые врачи настаивают на повторном исследовании или используют дополнительные методы диагностики (к примеру, ИФА).

Подготовка к диагностике

Особой подготовки к диагностике не требуется.

Для анализа можно использовать мочу, слюну, кровь, но, как правило, чаще применяется исследование мазка. Перед сдачей анализа нужно соблюсти ряд простых правил:

За сутки до анализа исключить алкоголь.
Отказаться от половых контактов за 1–2 дня до назначенной даты.
За 1,5-2 часа до забора материала разрешается последний раз сходить в туалет.

Перед тем, как идти к врачу, нужно соблюсти элементарные правила гигиены.

pchranaliz

Как сдавать анализ женщине?

Процедура сдачи анализа аналогична любому гинекологическому исследованию. Женщина удобно располагается в гинекологическом кресле, после чего врач наносит на шейку матки специальный стерильный раствор. Затем с помощью особой щеточки гинеколог аккуратно делает соскоб вращательными движениями. Вся процедура занимает не более двух минут.

СПРАВКА! Если после забора материала прошло слишком много времени, либо врач был неаккуратен, к полученному материалу могут присоединиться микроорганизмы из окружающей среды, в результате чего результат получится недостоверным.

Полученный биоматериал помещается в стерильную пробирку и отправляется в лабораторию.

Расшифровка результатов анализов методом полимеразная цепная реакция

Расшифровкой результатов занимается врач. Самостоятельно пытаться увидеть что-либо в лабораторном бланке нет смысла, поскольку обозначения могут быть понятны только специалисту.

Количественное исследование оформляется в виде таблицы. В первом столбце указаны типы классов вируса (к примеру, А9 — вирусы с высокой степенью онкогенности), во втором — фраза «не обнаружено» или «обнаружено».

Наилучший вариант — если все классы вирусов оказываются не обнаруженными.

Если же один или несколько классов обнаружены, последняя строка, Lg, выражается в количественном показателе. Значения числа следующие:

Lg меньше 3 — незначительное количество вирусных клеток.
Lg 3–5 — пограничное количество, есть риск заражения.
Lg больше 5 — критическая концентрация вируса.

Через некоторое время анализ проводят повторно, чтобы исключить ложноположительный или ложноотрицательный результаты. На основании данных исследований ставится диагноз и назначается лечение.

Где можно пройти обследование?

ПЦР-диагностика осуществляется в лабораторных условиях. При обращении в районную поликлинику будет выдано направление на обследование в лаборатории при поликлинике или в женскую консультацию, где осуществляется данное исследование.

Без направления по собственной инициативе (для профилактики) или при повторном анализе через некоторое время можно самостоятельно обратиться в любую частную лабораторию или медицинский центр, где предоставляется данная услуга.

Пациентке назначат удобное время, расскажут о процедуре и подготовке к ней, а также о сроках выдачи результатов. Обычно результаты анализа готовы на следующий день.

СПРАВКА! Можно заказать срочный анализ, тогда результаты выдадут на руки в этот же день. Такое обследование будет стоить дороже.

Стоимость одного анализа (на один штамм вируса) обойдется примерно в 200–300 рублей. Комплексное обследование будет стоить от 500 до 2000 рублей.

ПЦР-исследование является одним из самых востребованных и надежных тестов для обнаружения ДНК патогенных микроорганизмов в организме человека, постановки диагноза и назначения лечения.

Для анализа одного обследования может быть недостаточно, поэтому через некоторое время понадобится повторная диагностика. Для ПЦР подходит кровь, моча, сперма, слюна, но чаще всего используется естественная смазка из влагалища или мужской уретры. Результаты анализа можно забрать уже на следующий день.