Исследование родинки в инвитро

Метод определения
Гистологическое исследование биоптатов кожи (окрашивание гематоксилин-эозином) с морфологическим описанием и оценкой согласно гистологической классификации ВОЗ.
Исследуемый материал
Биоптат кожи, фиксированный в забуференном 10% растворе формалина
Гистологическое исследование биоптатов кожи при наиболее тяжелых и распространенных заболеваниях, трудно поддающихся лечению из-за неясности пато- и гистогенеза многих из них (аллергические заболевания кожи, болезни обменного характера, генетически детерминированные заболевания, неинфекционные эритематозные, эритематозно-сквамозные и папулезные болезни, везикулобуллезные (везикулопустулезные) болезни, сосудистые поражения, болезни соединительной ткани, гранулематозные, инфекционные, вирусные и паразитарные болезни кожи).
В диагностике неонкологических болезней кожи большое значение имеет морфологическое (патогистологическое) исследование. Известно более тысячи неопухолевых заболеваний кожи, многие из которых, сходные по клиническим проявлениям, имеют разную этиологию и морфологическую картину. Биопсийное исследование дает возможность диагностировать заболевание на разных этапах его развития, определить стадию процесса, форму той или иной болезни.
Гистологическое исследование в дерматологии имеет свои методологические границы. В части случаев установить точный диагноз при морфологическом исследовании биоптата невозможно. Лишь немногие дерматозы, кроме опухолей, имеют характерное (специфичное) гистологическое строение. Чаще гистологическая картина позволяет только предполагать той или иной диагноз, а может быть совершенно неспецифичной.
Значение гистопатологического исследования часто заключается в подтверждении клинического диагноза или исключении тех дерматозов, диагностика которых основывалась на клинической картине заболевания.
Наибольшие трудности встречаются при гистологическом исследовании большой группы неинфекционных воспалительных дерматозов. При чешуйчатом и красном плоском лишае, красной волчанке гистологические изменения обычно специфичны, однако гистологический диагноз может быть только предположительным. При розовом лишае и парапсориазе гистологические изменения всегда неспецифичны. В случаях инфекционных заболеваний (глубокие микозы, туберкулез, сифилис) клинический диагноз может быть установлен только после применения более точных (ПЦР, иммунофлуоресценция) дополнительных методов определения возбудителя.
Сочетание клинических и морфологических данных делает клиническую диагностику возможной даже в тех случаях, когда изменения в структурах кожи не являются характерными.
Наиболее информативное гистологическое исследование возможно при получении патологоанатомом детальных клинических данных, включая дифференциальный диагноз и фотографии пораженного очага. Важно корректно провести биопсию пораженного очага. Гистологическое исследование полностью развившегося патологического элемента более информативно, чем исследование свежего или развивающегося элемента. Как правило, не рекомендуется включать нормальную ткань в участок биопсии (У.Ф. Левер, 2014) – многие дерматозы характеризуются гистологическими изменениями нижней части дермы и подкожной жировой ткани. Если на коже имеется несколько типов высыпных элементов, для точного гистологического диагноза целесообразно исследовать все.
Первый этап диагностики любого поражения кожи включает анализ анамнеза, симптомов, возникновения и течения заболевания, его продолжительности, локализации патологических изменений и других факторов экзогенного или эндогенного характера, в том числе эндокринных, обменных, нервных и иммунных нарушений. Большое значение имеют данные о давности заболевания, сезонности и склонности к рецидивам.
Пребывание больных в эндемичных районах позволяет установить диагноз инфекционных дерматозов (лейшманиоза, лепры, тропических трепонематозов и др.); работа с животными позволяет заподозрить глубокую трихофитию, сибирскую язву. Контакт с неблагоприятной профессиональной средой (углеводороды, химические соединения) обусловливает возникновение профессиональных дерматитов, экземы, меланодермий.
Литература
- Буллезные дерматозы (вопросы клинико-морфологической диагностики иморфогенеза по данным электронной и атомносиловой микроскопии). Под ред. В.И. Прохоренкова, А.А. Гайдаша, Л.Н. Синицы. – Красноярск: ООО «ИПЦ «КАСС». 2008;188.
- Грэхем-Браун Р., Бурк Д., Канлифф Т. Практическая дерматология. Пер. с англ. под ред. Н.М. Шаровой. – М.: Изд. «МедПресс-информ». 2011:360.
- Дерматовенерология. Национальное руководство. Под ред. Ю.К. Скрипкина, Ю.С. Бутова, О.Л. Иванова. – М.: Изд. «ГЭОТАР-Медиа». 2011:1024.
- Клиническая дерматовенерология: в 2-х т. Под ред. Ю.К. Скрипкина, Ю.С. Бутова. – М.: Изд. «ГЭОТАР-Медиа». 2009.
- Самцов А.В. Акне и акнеформные дерматозы: монография. – М.: Ют-Ком. 2009:288.
- Цветкова Г.М., Мордовцева В.В., Вавилов A.M., Мордовцев В.Н. Патоморфология болезней кожи. – М.: Изд. «Медицина». 2003:496.
- Elder D.E. et al. Lever’s Histopathology of the Skin. 11th edition. 2014:1544.
Источник
Метод определения
Микроскопия
Исследуемый материал
Смотрите в описании
Взятие биоматериала оплачивается отдельно.
Проводятся исследования любого материала, отчуждённого у пациентов с различными патологическими процессами: бронхобиопсии, гастробиопсии, колонобиопсии, биопсии ЛОР-органов и другие биопсии различных органов и тканей, взятые инвазивными и эндоскопическими методами.
Также исследуется операционный материал, органы и ткани, удалённые при различных операциях по поводу онкологических заболеваний, специфических и неспецифических, воспалительных и не воспалительных процессах. При этом даётся гистологический диагноз с оценкой уровня дифференцировки или степени злокачественности опухоли, степени распространённости патологического процесса или клинической стадии, состояние краёв резекции, фоновых изменений.
При диагностических биопсиях даётся микроскопическое описание и нозологическое заключение. В ясных и банальных случаях микроскопическое описание не даётся или ограничивается минимально, заключение ограничивается гистологическим диагнозом.
Гистологический диагноз может быть описательным в тех случаях, когда морфологические изменения не специфичны и не свидетельствуют в пользу какого-либо заболевания или когда недостаточно представляется клиницистами клиническая картина конкретного пациента.
Гистологическое заключение даётся в соответствии с последними гистологическими классификациями ВОЗ и медицинской номенклатурой принятой у нас в стране.
Для качественного исследования необходимо правильно оформлять направление на гистологическое исследование:
- заполнять все указанные в направлении пункты с точным указанием места локализации взятого материала, его связь с окружающими тканями, обязательно указывать основные клинические проявления и давность процесса;
- иссечение кусочков из органов для диагностической биопсии следует проводить исключительно острым инструментом, избегать сжатия пинцетом или зажимом с целью предупреждения разминания и деформации тканей. Не рекомендуется получение биопсийного материла электроинструментами, так как происходит деформация гистологических тканей и диагноз возможно поставить только в предположительной форме;
- объект, взятый для гистологического исследования, помещают в заранее приготовленную ёмкость с фиксирующей жидкостью 10% формалин; 10% формалин наливают в чистую посуду, так, чтобы формалина было не менее чем в 10 раз больше объёма фиксируемого объекта, после чего посуду закрывают герметической крышкой или пробкой. Нельзя применять формалин более высокой концентрации или формалин с вышедшим сроком годности – с белым осадком, нельзя помещать мелкий диагностический материал в посуду из тёмного малопрозрачного стекла с узким горлышком;
- в случаях, когда диагностический материал содержит примесь большого количества крови (соскобы со слизистых оболочек женских половых органов), следует, до помещения в фиксирующую жидкость, освободиться от крови, путём промывки соскобов в ванночке с теплым физиологическим раствором, поместив их в марлевый мешочек, либо промыть тёплой водой под краном, а затем, промокнув излишки промывной жидкости, поместить в фиксатор. При этом соскоб не должен содержать кровь, которая пагубно влияет на обработку материала, уменьшает количество представительного диагностического материала и снижает полноценность гистологического исследования;
- посуда с диагностическим или операционным материалом обязательно маркируется: пишется фамилия, инициалы и возраст пациента, присваивается номер. Маркировка не должна проводиться на крышке, закрывающей посуду;
- фрагменты ткани или органа, полученные при биопсии с диагностической целью, запрещается делить на части и посылать в разные патологоанатомические лаборатории;
- материал для патогистологического исследования должен быть достаточно представительным, а кусочки, после специальной обработки и окраски, сохранять информацию для диагноза или диагностического описания;
- материал в виде слизи, экссудата или крови, а также очень мелкий материал (менее 1 мм) не считается полноценным объектом гистологического исследования.
Источник
Метод определения
Гистологическое исследование биоптата кожи (опухолевого очага) (окрашивание гематоксилин-эозином) с морфологической оценкой опухоли согласно гистологической классификации ВОЗ, оценкой глубины инвазии по шкале Кларка и Бреслоу.
Иммуногистохимическое исследование с применением антител к протеину S-100, Melan A, HMB-45, SOX-10 (пероксидазный и авидин-биотиновый методы).
Исследуемый материал
Парафиновый блок с биоптатом кожи (опухолевого очага)
Меланоцитарные опухоли кожи представляют собой гетерогенную группу доброкачественных и злокачественных новообразований со специфическими клиническими, морфологическими и генетическими признаками. Клинически и с точки зрения здравоохранения, злокачественные меланомы являются значимой группой злокачественных опухолей кожи в связи с высокой тенденцией к лимфогенному и гематогенному метастазированию. Частота меланом составляет 1,8-2,2 на 100 тыс. населения и 1% от числа всех злокачественных новообразований. Меланомы возникают у женщин гораздо чаще, чем у мужчин.
В 50-е и 60-е годы ХХ века считалось, что при обнаружении меланомы пациент имеет плохой прогноз, но с середины 1970-х годов выживаемость при этом заболевании в развитых странах значительно возросла. Это связано не только с ранней диагностикой, но и с программой Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) по первичной и вторичной профилактике заболевания.
Преимущественной локализацией меланомы у женщин являются нижние конечности (голень), у мужчин – туловище (чаще спина); у лиц обоих полов старшей возрастной группы (65 лет и старше) меланома локализуется преимущественно на коже лица. В значительном большинстве случаев (примерно у 70% пациентов) меланома развивается на месте врожденных или приобретенных невусов, и только у 28-30% – на неизмененной коже (melanoma cutis de novo).
При подозрении на меланому обязательно проводят биопсию пораженного очага с последующим гистологическим исследованием, оценкой краев резекции опухоли. Определяющим в диагностике является морфологическое исследование удаленного очага с последующим иммуногистохимическим исследованием.
В дифференциальной диагностике меланомы принято использовать ИГХ исследование биоптатов для оценки экспрессии панели маркеров, которые в комплексном применении обеспечивают максимальную чувствительность и специфичность иммуноморфологического исследования. Такой комплекс маркеров чаще включает протеин S-100, Melan А (MART-1), HMB-45, SOX-10, а также некоторые другие.
Протеин S-100 впервые был идентифицирован в 1965 г. B.W. Moore и получил свое название благодаря растворимости в 100% насыщенном растворе сульфата аммония. Относится к группе кальций связывающих белков с молекулярной массой 21 кДа, которые участвуют в клеточном цикле, дифференцировке, в процессах взаимодействия цитоскелета с мембраной, выполняют как внутриклеточные, так и внеклеточные функции. Экспрессируется шванновскими клетками периферической нервной системы, гистиоцитами с антиген-презентирующей функцией типа клеток Лангерганса, адипоцитами, хондроцитами, меланоцитами, миоэпителиальными клетками, клетками мозгового вещества надпочечников, фолликулярными дендритными клетками. Протеин S-100 локализуется в клеточной мембране, цитоплазме, ядре. С диагностической точки зрения, белок S-100 рассматривается как чувствительный, но неспецифический маркер меланоцитов (может выявляться в клетках других опухолей: липосарком, хондросарком, шванном и пр.), в дифференциальной диагностике экспрессия протеина S-100 используется в панели с другими маркерами меланомы. Ген Меlan A/MART-1 (Melanoma Antigen Recognized by T-cells 1) кодирует белок с молекулярной массой 20-22 кДа, связанный с эндоплазматическим ретикулумом и премеланосомами, распознаваемый Т-лимфоцитами. Гликопротеин Меlan A/MART-1 локализуется на внутренней мембране премеланосом 1, 2, 3-го типов. Меlan A/MART-1 является более специфичным маркером, чем белок S-100, поэтому его включают в стандартную панель для типирования меланом.
HMB-45 (Melanosome) – специфический меланосомный антиген (Melanosome Specific Antigen, MSA), который взаимодействует с чувствительной к нейроаминидазе олигосахаридной боковой цепью гликоконъюгата. Кодирует белок GP100 с молекулярной массой 10 кДа, который локализуется на внутренней мембране премеланосом 1, 2, 3-го типов, обнаруженный моноклональным антителом HMB-45. Он является высокоспецифичным маркером меланоцитарной дифференцировки, однако HMB-45 менее чувствителен, чем Меlan A.
SOX-10 (member of the sex-determining region Y-related HMG-box family) – белок, кодируемый геном на 22-й хромосоме (22q13.1), является ядерно-транскрипционным фактором, участвующим в регуляции миграции клеток нервного гребня на этапах эмбриогенеза, в дифференцировке клеток меланоцитарной линии. Экспрессия ядерного белка SOX-10 сохраняется в клетках с признаками глиальной и шванновской дифференцировки, миоэпителиальных клетках слюнных, бронхиальных, эккриновых и молочных желез, а также наблюдается в тучных клетках различных тканей и органов, как в ядре, так и в цитоплазме. Исследованиями последних лет показано, что SOX-10 является более специфичным и чувствительным маркером меланом обычного, веретенообразного и десмопластического подтипов по сравнению с протеином S-100. Рутинно используемые маркеры меланомы HMB-45 и Меlan A/MART-1 в десмопластической меланоме выявляются в 10% случаев, в то время как чувствительность и специфичность SOX-10 для определения десмопластической меланомы составляет до 98%.
В ряде случаев дополнительно проводится определение экспрессии следующих маркеров:
MiTF (Microphthalmia-associated Transcription Factor) – известного, как основной белок класса E спирали петли спирали 32 или bHLHe32, кодируемый геном MITF. Член семейства транскрипционных факторов микрофтальмии, регулирующих гены, которые кодируют ферменты меланогенеза. Является ведущим регуляторным меланоцитарным ядерным белком, регулирующим экспрессию белков: тирозиназы и связанного с тирозиназой белка TYRP1 (Tyrosinase-related protein 1), а также MART-1, GP-100. Высокая экспрессия MiTF наблюдается в 81-100% меланом, однако экспрессия часто отрицательна в вариантах из десмопластических и веретенообразных клеток.
PNL2 (Melanoma Associated Antigen) – белок, присутствующий в цитоплазме активированных меланоцитов и меланоцитарных опухолей. Антитела к PNL2 обладают высокой чувствительностью для выявления метастатической меланомы (87%), в отличие от антител к НМВ-45 (76%) и антител к MART-1 (82%). Используется для выявления внутриэпидермальных невусов, в то время как дермальный компонент сложных невусов не реагирует с антителами к PNL2.
Литература
- Ахмедова А.А., Шихлярова А.И., Шейко Е.А., Сустретов В.А. Меланома: Некоторые современные аспекты развития и диагностики. Современные проблемы науки и образования. 2017;5;181. https://www.science-education.ru/ru/article/view?id=27024
- Гилязутдинов И.А., Хасанов Р.Ш., Сафин И.Р., Моисеев В.Н. Злокачественные опухоли мягких тканей и меланома кожи. – М.: Изд. «Практическая Медицина». 2010:204.
- Клинические рекомендации. Меланома кожи. Ассоциация онкологов России. Ассоциация специалистов по проблемам меланомы. 2017:77. https://oncology-association.ru/docs/melanoma_kozhi_2017.pdf
- Лезвинская Е.М., Вавилов А.М. Лимфопролиферативные опухоли кожи. – СПб.: Изд. «Практическая Медицина». 2010:368.
- Новик А.В. Практическая онкология. 2011;12(1):185.
- Червонная Л.В. Пигментные опухоли кожи. – СПб.: Изд. «ГЭОТАР-Медиа». 2014:224.
- Bloethner S., Scherer D., Drechsel M. et al. Malignant melanoma – a genetic overview. Actas dermo-sifiliográficas. 2009;100(1):3851.
- Hersey P., Smalley K.S., Weeraratna A. et al. Meeting report from the 7th International Melanoma Congress, Sydney, November, 2010. Pigment cell and melanoma research. 2011;24(1):15.
- Hoek K.S., Goding C.R. Cancer stem cells versus phenotypeswitching in melanoma. Pigment cell and melanoma research. 2010;23(6):746759.
- Kyrgidis A., Tzellos T.G., Triaridis S. Melanoma: Stem cells, sun exposure and hallmarks for carcinogenesis, molecular concepts and future clinical implications. Journal of carcinogenesis. 2010;9(3):115.
- Mueller D.W., Bosserhoff A.K. Role of miRNAs in the progression of malignant melanoma. British journal of cancer. 2009;101(4):551556.
- Palmieri G., Capone M., Ascierto M.L. et al. Main roads to melanoma. Journal of translational medicine. 2009;7(86):16.
- Spatz A., Stock N., Batist G. et al. The biology of melanoma prognostic factors. Discov. Med. 2010;10(50.):87.
- Dabbs D.J. Diagnostic Immunohistochemistry: Theranostic and Genomic Applications. Elsevier, 4-th Edition. 2013:960.
Источник
Метод определения
Микроскопия
Исследуемый материал
Смотрите в описании
Взятие биоматериала оплачивается отдельно.
Проводятся исследования любого материала, отчуждённого у пациентов с различными патологическими процессами: бронхобиопсии, гастробиопсии, колонобиопсии, биопсии ЛОР-органов и другие биопсии различных органов и тканей, взятые инвазивными и эндоскопическими методами.
Также исследуется операционный материал, органы и ткани, удалённые при различных операциях по поводу онкологических заболеваний, специфических и неспецифических, воспалительных и не воспалительных процессах. При этом даётся гистологический диагноз с оценкой уровня дифференцировки или степени злокачественности опухоли, степени распространённости патологического процесса или клинической стадии, состояние краёв резекции, фоновых изменений.
При диагностических биопсиях даётся микроскопическое описание и нозологическое заключение. В ясных и банальных случаях микроскопическое описание не даётся или ограничивается минимально, заключение ограничивается гистологическим диагнозом.
Гистологический диагноз может быть описательным в тех случаях, когда морфологические изменения не специфичны и не свидетельствуют в пользу какого-либо заболевания или когда недостаточно представляется клиницистами клиническая картина конкретного пациента.
Гистологическое заключение даётся в соответствии с последними гистологическими классификациями ВОЗ и медицинской номенклатурой принятой у нас в стране.
Для качественного исследования необходимо правильно оформлять направление на гистологическое исследование:
- заполнять все указанные в направлении пункты с точным указанием места локализации взятого материала, его связь с окружающими тканями, обязательно указывать основные клинические проявления и давность процесса;
- иссечение кусочков из органов для диагностической биопсии следует проводить исключительно острым инструментом, избегать сжатия пинцетом или зажимом с целью предупреждения разминания и деформации тканей. Не рекомендуется получение биопсийного материла электроинструментами, так как происходит деформация гистологических тканей и диагноз возможно поставить только в предположительной форме;
- объект, взятый для гистологического исследования, помещают в заранее приготовленную ёмкость с фиксирующей жидкостью 10% формалин; 10% формалин наливают в чистую посуду, так, чтобы формалина было не менее чем в 10 раз больше объёма фиксируемого объекта, после чего посуду закрывают герметической крышкой или пробкой. Нельзя применять формалин более высокой концентрации или формалин с вышедшим сроком годности – с белым осадком, нельзя помещать мелкий диагностический материал в посуду из тёмного малопрозрачного стекла с узким горлышком;
- в случаях, когда диагностический материал содержит примесь большого количества крови (соскобы со слизистых оболочек женских половых органов), следует, до помещения в фиксирующую жидкость, освободиться от крови, путём промывки соскобов в ванночке с теплым физиологическим раствором, поместив их в марлевый мешочек, либо промыть тёплой водой под краном, а затем, промокнув излишки промывной жидкости, поместить в фиксатор. При этом соскоб не должен содержать кровь, которая пагубно влияет на обработку материала, уменьшает количество представительного диагностического материала и снижает полноценность гистологического исследования;
- посуда с диагностическим или операционным материалом обязательно маркируется: пишется фамилия, инициалы и возраст пациента, присваивается номер. Маркировка не должна проводиться на крышке, закрывающей посуду;
- фрагменты ткани или органа, полученные при биопсии с диагностической целью, запрещается делить на части и посылать в разные патологоанатомические лаборатории;
- материал для патогистологического исследования должен быть достаточно представительным, а кусочки, после специальной обработки и окраски, сохранять информацию для диагноза или диагностического описания;
- материал в виде слизи, экссудата или крови, а также очень мелкий материал (менее 1 мм) не считается полноценным объектом гистологического исследования.
Источник