Днк типирование впч онкогенный

Папилломавирусы (вирусы папилломы человека, ВПЧ, HPV) – возбудители, обладающие онкогенным действием, т.е. способностью вызывать развитие злокачественных опухолей. Анализ на онкогенные ВПЧ – важнейшая часть диагностики многих онкологических заболеваний.

Согласно научным данным, эти микроорганизмы связаны с 100% случаями рака шейки матки, 90% случаями рака цервикального канала и более 50% случаев злокачественных опухолей мочевого пузыря, прямой кишки, аногенитальной области. Вирус также провоцирует онкопатологии глотки и ротовой полости.

В Университетской клинике можно сдать анализы на онкогенные ВПЧ, наиболее часто вызывающие злокачественные опухоли.

Что такое онкогенные ВПЧ и почему их нужно обнаруживать

Папилломавирусы делятся на типы (штаммы), отличающиеся своей онкогенностью – способностью вызывать предраковые и раковые заболевания. Этот показатель может быть высоким, низким и средним. Существуют папилломавирусы, практически не провоцирующие опухоли.

Поэтому, выявив штамм возбудителя, можно понять, насколько он опасен в плане возникновения рака. Чаще всего онкологию вызывают штаммы 16, 18, 31, 33, 39, 50, 59, 64, 68, 70. Перечень наиболее опасных папилломавирусов постоянно пополняется, поскольку учёные открывают новые типы возбудителей, а у некоторых, ранее считавшихся менее опасными, обнаруживается высокая способность провоцировать опухоли.

Онкологию могут вызвать не только высоко – но и среднеонкогенные вирусы. Поэтому их высокая концентрация также опасна. Коварны и низкоонкогенные штаммы, вызывающие развитие бородавок на коже и слизистых, а также некоторых кожных заболеваний. Поэтому в комплексные методы диагностики, кроме выявления самых онкогенных штаммов, включают определение некоторых типов возбудителей с более низкой опухолевой активностью.

Как ВПЧ провоцирует рак

Возбудитель, попадая в организм, внедряется в клетки эпителия – ткани, покрывающей кожу и слизистую органов. Отличительной чертой вирусов, в том числе папилломавируса является способность превращать чужие клеточные элементы в «инкубатор», производящий новые болезнетворные микроорганизмы.

В клетках-хозяевах болезнетворный организм хранит свою «вирусную базу», продуцирует белки, необходимые для его жизнедеятельности и собирает готовые вирусные частицы – вирионы. Поэтому поражение постоянно усиливается и проникает вглубь тканей.

Заражение отрицательно влияет на процесс деления и созревания клеток органа, где он «обосновался». Из-за его губительного действия образуются неправильно развитые клеточные элементы, отличающиеся от нормальных строением, размером, формой.

Изменяется центральный элемент клетки – ядро, которое становится слишком большим, маленьким, деформированным. Некоторые поражённые клетки содержат два ядра. Поскольку это элемент содержит генетическую информацию, важную для процесса клеточного деления, в тканях появляются фигуры атипичного митоза – атипичные клетки, которые не могут правильно разделиться.

Неправильно развитые (атипичные) клетки, занимают среднее положение между здоровыми и злокачественными. Такое состояние называется дисплазией или предраком. На поверхности органа они образуют очаг измененной ткани. Поверхность эпителия меняется, становясь зернистой. В тяжелых случаях она приобретает вид «булыжной мостовой».

Дисплазия лучше проявляется, если смазать эпителий слабым раствором уксуса или йодным раствором. Поступает светлое пятно, на котором видны неправильно развитые расширенные сосуды.

По мере воздействия вируса проявления атипии – отличия клеток от здоровых, усиливаются. Вначале наблюдается лёгкая атипия (LSIL), при которой клеточные элементы максимально сохраняют сходство со здоровыми. Затем она становится более тяжёлой (HSIL), и клетки приобретают злокачественные черты. В результате предраковое поражение переходит в злокачественную опухоль. Процесс трансформации может занять от нескольких месяцев до нескольких лет. Спрогнозировать это процесс сложно, но, как правило, больше возбудителей содержится в тканях, тем быстрее развивается онкология. Поэтому чтобы не допустить развития онкологии, нужно как можно раньше выявить вирус, определить его концентрацию и начать лечение.

Прогрессирование заболевания от инфицирования ВПЧ до развития рака шейки матки

Обнаружение папилломавирусной инфекции до начала выраженного перерождения клеток, позволяет вылечиться с помощью лекарств без хирургических методов. Именно поэтому так важно своевременное проведение лабораторной диагностики высокоонкогенных папилломавирусов.

Наиболее распространенные варианты анализов на онкогенные ВПЧ (HPV)

Для выявления папилломавирусов используются ДНК-методы, выявляющие возбудителей по фрагментам их генного материала. Все эти лабораторные исследования можно схематически разделить на группы:

Качественные – выявляющие присутствие определённых штаммов.
Количественные – показывающие наличие вирусов и их концентрацию.
Типирование – определение типа папилломавируса.

Существуют комплексные исследования, во время которых определяется наличие возбудителей, их штамм и концентрация. От объема полученных данных зависит сложность диагностики ВПЧ и её цена.

Анализ	Характеристика
HPV 16 и18 качественный	Обнаружение двух штаммов наиболее высокого онкогенного риска.
HPV 16/18, диагностика, типирование и количественное исследование	Обнаружение двух штаммов с самой высокой злокачественной активностью, определение концентрации каждого из них.
HPV 31/33 качественное исследование	Обнаружение двух других штаммов онкогенных папилломавирусов. Может назначаться совместно с определением HPV 16 и 18.
HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 ДНК генотипирование	Обнаружение возбудителей, чаще всего вызывающих рак. Показывает имеющиеся штаммы, но не выявляет их количество.
HPV 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 – количественно без типирования	Определение суммарной концентрации папилломавирусов, без определения их штаммов.
HPV низкого – 6, 11, 44 и высокого – 16, 18, 26, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82 канцерогенного риска – выявление, типирование и количественное определение	Наиболее полная диагностика, показывающая количество, тип, и концентрацию вирусов, чаще всего встречающихся в организме. Определяет не только высокоонкогенные, но и средне- и низкоонкогенные типы, которые приводят к возникновению бородавок и других заболеваний.

В каких случаях проводятся анализы на онкогенные ВПЧ

Обнаружение на шейке матки, во влагалище или на слизистой других органов подозрительных очагов, напоминающих предраковые и раковые поражения. Лабораторная диагностика необходима, поскольку изменения могут быть вызваны не папилломавирусом, а другими заболеваниями – кожными патологиями, доброкачественными опухолями, инфекциями, в том числе венерическими, например, сифилисом или мягким шанкром.
Обнаружение в мазках на рак и предрак по Папаниколау атипичных клеток. Дает возможность выявить тип вирусов, вызвавших изменения, и определить их онкогенность.
Мониторинг лечения папилломавирусной инфекции. Лабораторная диагностика показывает эффективность терапии.
Наблюдение после лечения. Вирусы могут сохраняться в эпителии длительное время, вызывая рецидивы – повторное проявление заболеваний. Поэтому после излечения нужно периодически проходить обследоваться.
Скрининг шейки матки. Профилактическое исследование, которые желательно периодически проходить любой женщине. Диагностика выявляет заражение даже при отсутствии жалоб и изменений на шейке матки.

Как подготовиться к анализу на онкогенные ВПЧ

За двое суток взятия материала исключаются интимные контакты, искажающие результат диагностики.
За сутки до обследования следует отказаться от спринцеваний и введения лекарств во влагалище. Лекарственные препараты делают взятый материал “грязным”, а спринцевание “вымоет”, клетки эпителия в том числе, зараженные ВПЧ онкогенного типа, находящиеся на поверхности слизистой.
Материал не берется во время менструации, сразу после родов и аборта – из-за примеси крови результаты будут неточными.
Между проведением трансвагинального УЗИ с введением датчика во влагалище и взятием биоматериала должно пройти не менее 48 часов. Иначе образец загрязнится гелем, используемым при ультразвуковой диагностике. Поэтому при совпадении сроков процедур сначала берется материал для лабораторной диагностики, а потом проводится УЗИ.
Перед забором биоматериала из уретры нельзя мочиться в течение 2-3 часов, иначе вытекающая урина смоет вирусные частицы.

Как берется материал для анализа на онкогенные штаммы

Для обнаружения возбудителя берется соскоб:

С поверхности шейки матки.
Из цервикального канала.
Со стенок влагалища.

С поверхности мочеиспускательного канала – этот анализ на ВПЧ онкогенного риска проводится мужчинам и женщинам при подозрении на раковые и предраковые патологии мочевого пузыря и уретры.

Соскобы у женщин берутся на гинекологическом кресле, а у мужчин – на кушетке:

Материал с поверхности шейки матки и цервикального канала берётся специальным устройством цитощеткой, оснащённой съемной головкой. После проведения соскоба нижняя часть щеточки отделяется и помещается в специальный раствор для транспортировки в лабораторию.
Со стенки влагалища образцы берут при помощи специального зонда – тампона или комбинированного зонда, снабженного мягкой частью. Нижний сегмент устройства вместе со взятым материалам отделяется и помещается в транспортировочную жидкость.
Соскоб из мочеиспускательного канала берётся при помощи тонкого зонда со съемной частью, которая также отделяется и кладется в раствор.

Цитощетка цервикальная

Каждая порция помещается в отдельную емкость и маркируется. Может быть взят один соскоб или несколько – все зависит от конкретного заболевания. Все образцы отправляют в лабораторию.

Исследование на штаммы ВПЧ высокого онкогенного риска безвредно, безболезненно и не сопровождается нарушением целостности тканей. В Университетской клинике проводятся различные варианты таких анализов. Выбрать наиболее подходящий вариант можно, проконсультировавшись у врача гинеколога или уролога.

Как проводится анализ на онкогенные ВПЧ

В лаборатории полученный материал очищают от примесей. С помощью специальных растворов из него выделяют ДНК возбудителя. В дальнейшем исследование проводят двумя методами:

С помощью ПЦР-методики, которую иначе называют реал-тайм ПЦР или амплификацией мишени. При её проведении объём полученного материала многократно увеличивают – амлифицируют. Это достигается репликацией – созданием копий – реплик генетических фрагментов. Зачем ДНК соединяют с реактивами, реагирующими, определенные штаммы вирусов. В результате обнаруживаются соединения, выявляемые лабораторным путем. Их наличие и говорит о присутствии вируса.
С помощью амплификации сигнала – методов гибридного захвата, Digene-теста, Hybrid Capture Technology. В этом случае вещества-гибриды, которые получаются при соединении реактивов и генетического материала, с помощью лабораторных методов заставляют светиться. Это свечение усиливают (амплифицируют) и обнаруживают специальным прибором. По параметрам свечения определяют присутствие вируса и его тип – штамм.

Полимеразная цепная реакция

При проведении количественного исследования с помощью компьютерной программы анализируется объём полученного генетического материала и сила свечения гибридов. По ним и определяют количество вируса.

ДНК – методы позволяют проводить типирование вируса. Для этого применяются реактивы, реагирующие на определенный штамм возбудителя. Точность генетических исследований приближается к 100%.

Какие сведения указываются в результатах анализа на онкогенные ВПЧ и как его расшифровать

В бланке результатов указываются:

Фамилия, имя, отчество, пациента, его пол и возраст.
Область, откуда был взят мазок
Даты взятия и исследования образца.
КВМ – контроль взятия материала. Это показатель качества соскоба, указывающий на концентрацию клеток в нем. В норме он должен быть не менее 4 Lg. Меньший показатель говорит о небольшом содержании клеток в образце и его низкой информативности. В этом случае соскоб берётся заново.
Абсолютная вирусная нагрузка – количество онкогенных вирусов. Измеряется в Lg (абсолютных копий) /10^ 5 клеток эпителия, которые поражает папилломавирус. Вирусная нагрузка менее 3 Lg нередко игнорируется, поскольку в таких количествах микроорганизм не вызывает болезней. В бланке результатов ставится отметка, что папилломавирус не обнаружен. В остальных случаях указывается концентрация возбудителя.
Общая вирусная нагрузка – сумма концентраций каждого штамма. Ее высокий уровень, даже если концентрация каждого из типов онкогенных ВПЧ небольшая – неблагоприятный результат.
Относительная вирусная нагрузка – отношение общего количества клеток в образце к абсолютной вирусной нагрузке. В норме она должна отсутствовать. Отрицательный показатель говорит о наличии папилломавируса в спящем (неактивном) состоянии. Положительный показатель свидетельствуют о развитии вирусного процесса и высоком риске возникновения рака.

Читайте также: Кровь на впч для чего

Показатели абсолютной вирусной нагрузки

Данные анализа	Вирусная нагрузка, Lg	Интерпретация результата
Менее 3	Незначительная	В бланке может не указываться
3-5	Умеренная	Умеренный риск развития онкологии
Более 5	Высокая	Высокий риск развития онкологии

Поделиться ссылкой:

Источник

Автор статьи

Практикующий-дерматовенеролог, окончил Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова.

По данным Всемирной организации здравоохранения, в настоящее время ежегодно регистрируется более полумиллиона случаев развития рака шейки матки. Около 250 тысяч женщин погибают от этой болезни из-за слишком поздней диагностики и неэффективного лечения. Вирус папилломы человека является одним из наиболее опасных онкогенных вирусов, провоцирующих развитие злокачественных опухолей.

Что это такое?

фото: вирус папилломы человека ВПЧ – название для объединенного семейства вирусов, включающего в себя более 100 различных видов. Все эти штаммы разделены по степени онкогенного риска. Около 13 штаммов приводят к возникновению различных видов рака. При излечении от вируса, человек может инфицироваться повторно.

Виды вируса

По статистике, больше половины населения России являются носителями разных видов вируса, что показывает огромную распространенность вируса. Но это не значит, что ВПЧ для всех становится смертельным диагнозом. Многие типы папилломавируса никак не отражаются на здоровье человека, и приносят только эстетические дефекты в виде папиллом и бородавок.

Существуют такие штаммы вируса, при которых развитие рака практически невозможно, так называемый ВПЧ низкого онкогенного риска. Также широко распространены виды среднего онкогенного типа, и эти две категории включают в себя большинство разновидностей папилломавируса.

фото: впч высокого онкогенного риска у женщин

Видов вируса, провоцирующих возникновение злокачественных опухолей, значительно меньше. Сюда включаются 31, 33, 6, 11, 16 и 18 типы. Последние два представляют большую угрозу для женщин. Сегодня с помощью многочисленных исследований достоверно установлена связь между развитием рака шейки матки и инфицированием 16 и 18 типом ВПЧ. В 70% случаев именно с разрушительным воздействием инфекции связано появление злокачественных новообразований. Рак шейки матки стоит на втором месте по наиболее распространенным видам рака среди женщин.

Уже в первые два года после попадания вируса в организм у 15-30% женщин происходят изменения в области шейки матки, и возникает предраковое состояние. За это же время такие изменения возникают лишь у 2% женщин, незараженных ВПЧ.

16 и 18 типы опасны полным отсутствием внешних проявлений. Только соответствующие анализы могут указать на наличие папилломовируса, в то время как сама инфекция протекает бессимптомно. Даже при обычном осмотре у гинеколога выявить заражением этими типами вируса невозможно. Такое проявление вируса называется латентной формой и без лечения может привести к развитию онкологии.

Способы передачи

передача впч половым путем

Наиболее распространенным путем передачи являются незащищенные половые контакты с носителями ВПЧ. Риск заразиться вирусом в первые три года после первого полового контакта составляет 46%. Именно поэтому к группам, традиционно находящимся в зоне риска, например, проституткам, добавляются те женщины и девушки, у которых может быть только один половой партнер. В частности, высокий процент инфицированных встречается среди подростков. Заражение может произойти при любом виде полового контакта, в том числе анального и орального.

Другой способ заражения – инфицирование новорожденных, проходящих через родовые пути. Если будущая мама является носителем ВПЧ, ребенок имеет высокий шанс подхватить вирус при естественных родах. Впоследствии у таких детей может развиваться папилломатоз гортани – вирусное заболевание, характеризующееся возникновением папиллом в гортани. Поэтому перед планированием беременности женщине необходимо вылечить инфекцию, если она присутствует.

Известен и контактно-бытовой путь заражения. Это может произойти через маленькие кожные раны при тесном контакте. Например, при использовании общих предметов гигиены, посещении спортзала или бассейна. При этом такой путь передачи не может привести к инфицированию высокоонкогенным типом ВПЧ. Зато этим способом вполне можно заразиться кожными бородавками.

Как происходит заражение

заражение впч ВПЧ инфицирует многослойный эпителий, что и определяет область поражения – кожа и слизистые оболочки. ДНК вируса стремится проникнуть в ядро клетки человека. Её целью является воспроизводство там онкогенных белков. После того, как это происходит, они начинают стремительно реплицироваться. Если это доброкачественный рост, то клетки не выходят за пределы эпителия. Если злокачественный, распространение патологического процесса запускает возникновение метастаз. При этом инкубационный период длится около трех месяцев.

Проявления ВПЧ

Бородавки. Плотные наросты, имеющие неровные поверхность и цвет от серого до черного. Появляются после заражения низкоонкогенными типами вируса. Не угрожают жизни и здоровью человека, но вызывают косметические проблемы. Чаще всего локализуются в районе рук и стоп, но также могут появляться на поверхности всей кожи. Существуют также подошвенные бородавки, которые уплотняются и грубеют при ходьбе. Их характерное отличие – появление крови при срезании верхушки.
Остроконечные кондиломы. Являются доброкачественными новообразованиями, располагающимися на коже и половых органах. Встречаются наросты телесного, розового или коричневого цвета. Их характерной особенностью является быстрое распространение. Могут возникать в области шейки матки, но не исключено и поражение мочеиспускательного канала, а также прямой кишки и ануса. Кондиломы доставляют дискомфорт в виде зуда и жжения. На ранней стадии чаще всего появляются одиночные наросты. На более поздних стадиях кондиломы показывают способность к слиянию. Не представляют опасности перерождения в злокачественные новообразования.
Плоские кондиломы. Более опасны в плане развития онкологии. Вероятность рака увеличивается с возникновением новых наростов. Этот вид кондилом обычно располагается на слизистой оболочке влагалища.
Бовеноидный папулез. Вирусное заболевание, считающееся предраковым. Характерная особенность – сыпь в области половых органов. Также возникают пигментные папулы – гладкие образования коричневого цвета. Папулы часто появляются вместе с кондиломами и бородавками. Компоненты сыпи могут привести к разным видам рака, опасным женщин.
Рак шейки матки. Для каждой женщины существует риск того, перерождения вируса в хроническую форму, а предраковое состояние в итоге может перерасти в рак. Если не заниматься лечением вируса, то это станет просто вопросом времени. У женщин с хорошим иммунитетом такие процессы происходят за 15 лет. У тех, чей организм страдает от ослабления иммунитета, например, у ВИЧ положительных женщин, на это потребуется всего 5 лет.

Диагностика заболевания

Нередко случается так, что женщина может обнаружить проблемы в организме после обычного визита к гинекологу, где у нее возьмут мазок. Чтобы выявить причины возможных заболеваний, врачу приходится проводить ряд дополнительных исследований и тестов.

Итак, порядок диагностики заболевания должен быть следующий:

Первичный внешний осмотр врача, на котором берется мазок для определения состояния микрофлоры влагалища, уровня лейкоцитов и выявления заболеваний.
Если результаты анализа пришли неудовлетворительные, о чем будет говорить повышенный уровень лейкоцитов, гинеколог назначает дополнительные анализы на ЗППП, в число которых обязательно входит несколько штаммов ВПЧ. В частности, используется ПЦР анализ, помогающий установить не только наличие вируса в организме, но и его типы. Совместно с ПРЦ делается количественный тест, диагностирующий уровень концентрации вируса. Этот показатель, а также количество новообразований влияют на возможность появления онкологии.
Когда результат показывает один или несколько типов ВПЧ, женщине назначается кольпоскопия. Это процедура осмотра шейки матки с помощью кольпоскопа – аппарата, предназначенного для многократного увеличения. Таким образом проводится детальное исследование шейки матки, влагалища и вульвы. С помощью кольпоскопии можно оценить, насколько вирус успел повлиять на состояние шейки матки, выявить очаги поражения, просмотреть наличие предраковых изменений и генитальных бородавок. Обычно гинеколог проводит расширенную кольпоскопию с использованием химических веществ для выявления атипичных очагов.
При диагностике ВПЧ назначается лечение, соответствующее типу вируса и его проявлениям.

Лечение папилломовируса

фото: Изопринозин Вирус папилломы человека может длительное время скрыто присутствовать в организме носителя и при этом никак не проявлять себя. Его развитие останавливает иммунная система, которая должна тормозить распространение чужеродной ДНК. Именно на поддержание и активизацию иммунитета направлено одно из направлений лечения. Такой метод называется консервативным и включает в себя назначение иммуномодулирующих и противовирусных препаратов (Изопринозин, Аллокин-альфа и другие).

Другое направление направлено на устранение последствий инфекции: удаление возникших папиллом и кондилом. Для этого существует несколько способов:

Хирургическое вмешательство. Представляет собой операцию по срезанию новообразований. Процедура проводится под местным наркозом. Недостатками этого метода является не только возможные последствия в виде шрамов, но и риск кровопотери. Кроме того, такой способ не дает гарантии удаления всех клеток папилломовируса.
Электрокоагуляция. Наиболее распространенный метод удаления папиллом и бородавок за счет дешевизны и доступности. Проводится с помощью высокочастотного тока, точечно воздействующего на наросты. Как и предыдущий способ, оставляет на теле следы от удаленных папиллом. Также не гарантирует отсутствие рецидивов.
Лазерная деструкция. Один из наиболее современных способ удаления папиллом. Для этого используется лазерный луч, который полностью убирает клетки папилломы, воздействуя на атипичные ткани. Такой метод считается наиболее надежным и безопасным. Не оставляет нежелательных последствий в виде рубцов и шрамов, сразу запаивает сосуды, чтобы предотвратить кровотечение.
Криодеструкция. Процедура проводится с помощью жидкого азота, который наносится на специальный аппликатор. Под воздействием жидкого азота нарост постепенно отпадает. Однако при таком методе возможно получение ожогов, что в конечном итоге даст нежелательный рубец. Это происходит из-за глубоко воздействия вещества на кожу.

Профилактика ВПЧ

Профилактика этого заболевания сводится к нескольким простым правилам:

Использование презервативов в качестве средства контрацепции при половом акте. Этот пункт особенно важен, так как половой путь передачи инфекции наиболее распространенный.
Осмотр у гинеколога. Женщинам раз в полгода нужно проходить осмотр у врача и сдавать мазок, чтобы знать о состоянии своего организма.
Поддержание иммунитета. Именно иммунная система дает основной отпор папилломовирусу, и хороший иммунитет может подавить его проявления еще до того, как инфекция разовьется.

фото: прививки против ВПЧ К неспецифическим методам профилактики относится прививки против ВПЧ высокоонкогенных типов. Эти вакцины защищают от 16 и 18 типа и могут обеспечить некоторую защиту от других типов вируса. Успешно прошедшие клинические испытания, вакцины считаются безопасными и эффективными. Однако вакцинация должна производиться до первого полового контакта, потому что она только препятствует проникновению вируса в организм, но никак не сможет вылечить уже имеющуюся инфекцию. Ими рекомендуется вакцинировать девочек в возрасте с 10 до 13 лет.

О том что такое онкогенный ВПЧ у женщин и к чему он может привести смотрите в нашем видео: